牛羊(yang)O型口蹄(ti)疫(yi)抗(kang)體ELISA抗(kang)體檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒說(shuo)明(ming)書(shu)

牛(niu)羊(yang)O型(xing)口蹄(ti)疫(yi)抗(kang)體ELISA 抗(kang)體檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒說(shuo)明(ming)書(shu)

【名(ming)  稱(cheng)】

通用名： 牛(niu)羊(yang)O型(xing)口蹄(ti)疫(yi)抗(kang)體 ELISA 抗(kang)體檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

拼(pin) 音(yin)：kou ti yi bing du O xing jing zheng ELISA kang ti jian ce shiji he

【原(yuan)  理(li)】

本品系由(you)包被(bei)口蹄(ti)疫(yi) O 型(xing) VP1 重組抗(kang)原(yuan)和口蹄(ti)疫(yi)O型(xing)VP1 蛋(dan)白單(dan)克 隆抗(kang)體及(ji)其他(ta)試劑(ji)組成(cheng)，應(ying)用酶聯免(mian)疫(yi)競爭法(fa)原(yuan)理(li)（ELISA） 檢(jian)測(ce)豬(zhu)血清 及(ji)牛(niu)、羊(yang)血清中口蹄(ti)疫(yi)病(bing)毒(du) O 型(xing)抗(kang)體。

【使(shi)用意義(yi)】

牛(niu)羊(yang)O型(xing)口蹄(ti)疫(yi)抗(kang)體 ELISA 抗(kang)體檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒用於檢(jian)測(ce)豬(zhu)血清及牛(niu)、羊(yang) 血清中口蹄(ti)疫(yi)病(bing)毒(du) O 型(xing)抗(kang)體。

【試(shi)劑(ji)盒組成(cheng)】

【樣(yang)品制備(bei)】

取(qu)動(dong)物全(quan)血，按常規方(fang)法(fa)制備(bei)血清，要求(qiu)血清清亮(liang)，無(wu)溶血。

【洗(xi)滌(di)液配制】

使(shi)用前，20×濃縮(suo)洗滌(di)液應(ying)恢(hui)復至(zhi)室(shi)溫（25℃左(zuo)右(you)） ，並搖(yao)動(dong)使(shi)沈(chen)澱(dian)的(de)鹽 溶解，然(ran)後用蒸(zheng)餾水或(huo)去離子(zi)水作 20 倍稀(xi)釋(shi)（例(li)如：用 20mL 濃縮(suo)液加 上(shang) 380mL 水），稀(xi)

釋(shi)好的(de)洗滌(di)液在 4℃可(ke)以(yi)存放(fang) 15 天。

【樣(yang)品稀釋(shi)】

待(dai)檢血清 5 倍稀(xi)釋(shi)：具(ju)體為(wei)在血清稀釋(shi)板中(zhong)按 5 倍稀(xi)釋(shi)待(dai)檢血清（80μL 樣 品稀釋(shi)液中加 20μL 待(dai)檢血清，混勻即可(ke)）。

註(zhu)意(yi)：陽性對(dui)照(zhao)血清和陰(yin)性對(dui)照(zhao)血清不(bu)用稀釋(shi)。

【使(shi)用方法(fa)】

1. 使(shi)用前將(jiang)試(shi)劑(ji)盒置於室(shi)溫 30 分(fen)鐘(zhong)，待(dai)其恢(hui)復至(zhi)室(shi)溫。(註(zhu)： 陰(yin)、陽對照(zhao) 血清不(bu)用回溫(wen)，從(cong) 4℃取(qu)出(chu)，即可(ke)使(shi)用，使用後立即放(fang)回4℃保(bao)存)

2. 取(qu)所需(xu)用量(liang)的(de) FMDV-O 抗(kang)原(yuan)包被(bei)板條(tiao)，設(she)陰(yin)性及(ji)陽性對(dui)照(zhao)各(ge) 2 孔(kong)，未用 的(de)板條(tiao)盡(jin)快(kuai)密(mi)封(feng)，2~8℃保(bao)存。

3. 陰(yin)性、陽性對(dui)照(zhao)孔(kong)分(fen)別(bie)加入(ru)陰(yin)性、 陽性對(dui)照(zhao)血清 50μL；樣(yang)品孔(kong)每(mei)孔(kong)加 入(ru)稀(xi)釋(shi)後的(de)血清樣本 50μL ，然(ran)後每(mei)孔(kong)加入(ru)酶(mei)標(biao)記(ji)物 50μL。

4. 輕(qing)微(wei)振蕩(dang)混(hun)勻；蓋(gai)上(shang)封(feng)板膜封(feng)板，置於 37℃環(huan)境避(bi)光反(fan)應(ying) 30 分(fen)鐘(zhong)。

5. 洗(xi)板：小(xiao)心(xin)揭開封(feng)板膜，將(jiang)孔(kong)內液體甩(shuai)幹，加洗滌液 300μL/孔(kong)，無(wu)需(xu)靜 置，棄去(qu)液體，充(chong)分(fen)洗(xi)滌(di) 4~5 次(ci)，最(zui)後壹(yi)次(ci)用吸水紙拍(pai)幹。

6. 顯(xian)色(se)：每(mei)孔(kong)先各(ge)加入(ru)底物 A 液 50μL ，再各(ge)加入(ru)底物 B 液 50μL ，輕(qing)輕(qing)振 蕩(dang)混(hun)勻，並在 37℃下避(bi)光反(fan)應(ying) 15 分(fen)鐘(zhong)。

7. 讀(du)數(shu)： 每(mei)孔(kong)各(ge)加 50μL 終(zhong)止(zhi)液，在酶(mei)標(biao)儀(yi)於 450nm 處(chu)測(ce)定(ding) OD 值(zhi)（在 5 分(fen)鐘(zhong)內(nei)讀(du)完(wan)數(shu)據）。

【結(jie)果(guo)判定(ding)】

成(cheng)立條(tiao)件(jian)：

陰(yin)性對(dui)照(zhao)： 陰(yin)性對(dui)照(zhao)孔(kong) OD 均(jun)值(zhi)≥ 0.5；

陽性對(dui)照(zhao)：陽性對(dui)照(zhao)孔(kong) OD 均(jun) 值(zhi)≤0.2 ，或(huo)陽性對(dui)照(zhao)阻(zu)斷(duan)率在 80%以(yi)上(shang)；

計(ji)算(suan)方(fang)法(fa)：阻(zu)斷(duan)率（PI）=（陰(yin)性對(dui)照(zhao) OD 值(zhi)均值(zhi)-樣(yang)品OD 值(zhi)）/ 陰(yin)性對(dui)照(zhao) OD 值(zhi)均值(zhi)×100%

結(jie)果(guo)判定(ding)：樣(yang)品阻斷率＜30% ，判為(wei)口蹄(ti)疫(yi)病(bing)毒(du) O 型(xing)抗(kang)體陰(yin)性；樣(yang)品阻斷 率≥30% ，判為(wei)口蹄(ti)疫(yi)病(bing)毒(du) O 型(xing)抗(kang)體陽性。

豬(zhu)血清效(xiao)價判定(ding)：

牛(niu)、羊(yang)血清效(xiao)價判定(ding)：

【註(zhu)意(yi)事項(xiang)】

1. 操(cao)作時(shi)必須(xu)戴(dai)手套，穿(chuan)工(gong)作衣，嚴格(ge)健(jian)全和執(zhi)行(xing)消(xiao)毒(du)隔(ge)離(li)制度。

2. 采集(ji)血清時應(ying)無(wu)菌操(cao)作，要(yao)求(qiu)血清清亮(liang)無(wu)溶血，避(bi)免(mian)使(shi)用嚴重溶血的(de)血 清。

3. 用於檢測(ce)的(de)樣品應(ying)保(bao)持(chi)新(xin)鮮血清保存時(shi)間(jian)不(bu)能太(tai)久(jiu)，血清解凍(dong)後應(ying)該(gai)充(chong) 分(fen)混(hun)勻，血清稀釋(shi)後在加樣前也(ye)要(yao)混合均勻，解(jie)凍(dong)後的(de)血清爭取(qu)壹次(ci)性(xing) 檢(jian)測(ce)完(wan)畢(bi)，如(ru)需(xu)做(zuo)多(duo)次(ci)檢(jian)測(ce)，建議少(shao)量(liang)分(fen)裝冷凍(dong)保(bao)存。

4. 若血清出現渾濁或(huo)沈澱，建議離(li)心後取(qu)上(shang)清檢測(ce)。

5. 試(shi)驗(yan)結果(guo)的(de)判定(ding)必須(xu)以(yi)酶(mei)標(biao)儀(yi)讀(du)數(shu)為準(zhun)。

6. 試(shi)驗(yan)中常用到的(de)酶標(biao)儀(yi)、加樣器(qi)、洗板機、恒溫(wen)箱及(ji)存放(fang)試(shi)劑(ji)的(de)冰(bing)箱等(deng) 儀(yi)器(qi)設(she)備(bei)要定(ding)期維(wei)護和校準(zhun)，確(que)保儀(yi)器(qi)設(she)備(bei)正常使用，避(bi)免(mian)試(shi)驗誤(wu)差(cha)。

7. 所有樣(yang)品洗滌液和各(ge)種(zhong)廢棄物都(dou)應(ying)按傳(chuan)染物處(chu)理。

8. 微(wei)孔(kong)板從(cong)冷藏(zang)環(huan)境中(zhong)取出(chu)時應(ying)在室(shi)溫中平衡(heng)至(zhi)潮(chao)氣(qi)幹盡(jin)後方(fang)可(ke)，未(wei)用完(wan) 的(de)微(wei)孔(kong)板須(xu)放(fang)入(ru)有幹燥(zao)劑(ji)的(de)密封(feng)袋中(zhong)保存。

9. 剩余樣(yang)品及廢棄物應(ying)經 121℃高(gao)壓蒸(zheng)汽滅(mie)菌 30 分(fen)鐘(zhong)，或(huo)用 5.0g/L 次(ci)氯(lv)酸(suan) 鈉等(deng)消(xiao)毒(du)劑(ji)處(chu)理 30 分(fen)鐘(zhong)後廢棄。

10. 不(bu)同(tong)批號試(shi)劑(ji)組分(fen)不(bu)得混(hun)用。

【貯(zhu)藏(zang)與有效(xiao)期(qi)】

2~8℃保(bao)存，有效(xiao)期(qi)為(wei) 12 個(ge)月(yue)。

溫(wen)馨(xin)提示(shi)：抗(kang)原(yuan)包被(bei)板真(zhen)空(kong)包裝袋(dai)若有漏(lou)氣(qi)，抗(kang)原(yuan)包被(bei)板仍(reng)然(ran)正常有效(xiao)， 不(bu)影(ying)響(xiang)實(shi)驗結(jie)果，請(qing)放(fang)心(xin)使(shi)用。

  僅(jin)供(gong)科研(yan)使(shi)用