馬爾(er)堡(bao)病毒PCR檢測試劑(ji)盒簡介(jie)

【產(chan)品(pin)名(ming)稱(cheng)】

通(tong)用名(ming)稱(cheng)：馬爾(er)堡(bao)病毒檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒（實(shi)時熒光(guang)PCR法）

英文名(ming)稱(cheng)：Marburg virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝(zhuang)規(gui)格(ge)】 25T/盒 & 50T/盒

【預期用途(tu)】

本試(shi)劑(ji)盒利(li)用實(shi)時熒光(guang)PCR原理(li)，定(ding)性檢(jian)測(ce)馬爾(er)堡(bao)病毒，對(dui)馬爾(er)堡(bao)病毒的診(zhen)斷(duan)和監(jian)控具(ju)有(you)重(zhong)要指導(dao)意義。

【檢驗(yan)原(yuan)理(li)】

本試(shi)劑(ji)盒針(zhen)對(dui)馬爾(er)堡(bao)病毒的高度保(bao)守區域設(she)計(ji)特(te)異(yi)性引物和探(tan)針，在(zai)反(fan)應體(ti)系中含(han)馬爾(er)堡(bao)病毒基因(yin)組模板(ban)的情(qing)況下(xia)，PCR反(fan)應得(de)以進行並釋(shi)放(fang)熒光(guang)信(xin)號。利(li)用熒光(guang)定(ding)量PCR儀對(dui)PCR過程(cheng)中相應通(tong)道(dao)信(xin)號(hao)進行實(shi)時監(jian)測和輸出(chu)，實(shi)現(xian)檢測(ce)結(jie)果的(de)定(ding)性分(fen)析。

【主要組成成份(fen)】

註：陰(yin)性對(dui)照(zhao)為(wei)滅菌(jun)純水，陽性對(dui)照(zhao)為(wei)含馬爾(er)堡(bao)靶(ba)基因(yin)的質(zhi)粒(li)。

【儲存(cun)條(tiao)件(jian)及有效期】避光(guang)-20℃以下(xia)保(bao)存(cun)，避(bi)免反(fan)復(fu)凍融，有效(xiao)期12個月。

【適用儀(yi)器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭(hang)州博日(ri)系列等多通(tong)道(dao)實(shi)時熒光(guang)定(ding)量PCR儀。

【樣本(ben)要求】

1.血液或血清(qing)樣品(pin)：使(shi)用無(wu)菌註射(she)液抽取(qu)樣(yang)品(pin)置(zhi)於(yu)離(li)心管中(zhong)待檢。

2.肌(ji)肉(rou)或(huo)內(nei)臟(zang)樣(yang)品(pin)：取(qu)少(shao)量(liang)樣(yang)品（2～3克）於(yu)研缽(bo)或勻漿(jiang)器中研磨，然(ran)後將(jiang)研磨勻漿(jiang)轉入無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)，3000rpm/min 離心(xin)10分鐘(zhong)取(qu)上清(qing)待檢。

3.應避(bi)免標(biao)本間(jian)交叉汙染(ran)。

4.標(biao)本收(shou)集(ji)後可(ke)立即(ji)檢(jian)測(ce)；若不(bu)能(neng)立即(ji)檢(jian)測(ce)，可(ke)置於(yu)2～8℃冷藏(zang)過夜保(bao)存(cun)；如(ru)需長(chang)期保存(cun)，標(biao)本應(ying)凍存(cun)於(yu)-80℃以下(xia)，避(bi)免反(fan)復(fu)凍融。

【檢驗(yan)方(fang)法】

1. 試劑(ji)準備(bei)（試劑(ji)準備(bei)區）

（1）從冰(bing)箱(xiang)中取(qu)出(chu)試(shi)劑(ji)盒, 從試(shi)劑(ji)盒中(zhong)取(qu)出(chu)實(shi)驗所(suo)需試(shi)劑(ji),充分(fen)融化混勻並瞬(shun)時離心以去除管壁(bi)附著液體(ti)。

（2）核算(suan)當次(ci)實(shi)驗所(suo)需要的反(fan)應數(shu)（n），並根(gen)據(ju)如(ru)下(xia)表(biao)所(suo)示(shi)反(fan)應體(ti)系計(ji)算(suan)當次(ci)實(shi)驗所(suo)需要的各(ge)種試(shi)劑(ji)量。

n =陰(yin)性對(dui)照(zhao)數(shu)（1T）+陽性對(dui)照(zhao)數(shu)（1T）+誤(wu)差預留(liu)量(liang)（1T）+樣本(ben)數(shu)

（3）在(zai)無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)加入上述試(shi)劑(ji)，充分(fen)混勻後瞬(shun)時離心。按(an)照(zhao)20 μL/管分(fen)裝(zhuang)量(liang)將(jiang)試(shi)劑(ji)分裝(zhuang)至(zhi)PCR反(fan)應管(guan)。

2.樣本(ben)準(zhun)備(bei)（樣本(ben)處理區）

用DNA/RNA提取(qu)試(shi)劑(ji)盒提(ti)取(qu)核(he)酸(suan)即(ji)可(ke)，具體(ti)操作按(an)照(zhao)其試劑(ji)盒說(shuo)明書操作。

3.加樣

在(zai)上述制(zhi)備(bei)好的(de)PCR反(fan)應樣(yang)本管中分別加入處理好(hao)的待測標(biao)本RNA各5 μl、終體(ti)積25 μl/管，蓋好PCR反(fan)應蓋混勻後瞬(shun)時低(di)速(su)離(li)心(xin)，轉移到PCR儀器上。陰(yin)性對(dui)照(zhao)和陽性對(dui)照(zhao)管(guan)則各(ge)加5 μL試劑(ji)盒自(zi)帶的(de)陰(yin)性對(dui)照(zhao)或(huo)陽性對(dui)照(zhao)品(pin)，終體(ti)積為(wei)25 μl/管，蓋好PCR反(fan)應蓋混勻後瞬(shun)時低(di)速(su)離(li)心(xin)，轉移到PCR儀器上。

4. PCR（PCR擴增(zeng)區）

（1）取(qu)樣(yang)本(ben)處理區準備(bei)好的(de)PCR反(fan)應管(guan)，放(fang)置(zhi)在(zai)實(shi)時熒光(guang)定(ding)量PCR儀樣(yang)品(pin)槽(cao)相應位(wei)置(zhi)，並記(ji)錄(lu)放(fang)置(zhi)順(shun)序。

（2）按(an)下(xia)表(biao)設(she)置(zhi)儀(yi)器核酸(suan)擴增相關(guan)參數(shu)進行PCR擴增(zeng)。

註：ABI系列熒光(guang)PCR儀在(zai)設(she)置時不(bu)選(xuan)ROX校正，設置(zhi)淬(cui)滅基團選(xuan)擇None。

【參考值(zhi)（參考範(fan)圍(wei)）】

1.試劑(ji)盒有(you)效(xiao)性判(pan)定：

 （1）陽性對(dui)照(zhao)：有(you)典型(xing)S型(xing)擴增曲(qu)線(xian)或(huo)Ct值≤35。

 （2）陰(yin)性對(dui)照(zhao)：Ct值＞38或無(wu)Ct值，線(xian)形(xing)為(wei)直線(xian)或(huo)輕(qing)微(wei)斜線，無(wu)指數(shu)增(zeng)長(chang)期。

2.標(biao)本結(jie)果判(pan)定：

（1）陽性：標(biao)本檢(jian)測(ce)結(jie)果Ct值≤35或有(you)明顯指數(shu)增(zeng)長(chang)期。

（2）可(ke)疑：標(biao)本檢(jian)測(ce)結(jie)果Ct值在(zai)35～38範(fan)圍(wei)內(nei)。此(ci)時應對(dui)標(biao)本進行重復(fu)檢(jian)測(ce)，如(ru)重復(fu)實(shi)驗結(jie)果Ct值仍(reng)在(zai)35～38範(fan)圍(wei)內(nei)，有(you)明顯指數(shu)增(zeng)長(chang)期，則判(pan)定為(wei)陽性，否則為(wei)陰(yin)性。

（3）陰(yin)性：標(biao)本檢(jian)測(ce)結(jie)果Ct值＞38或無(wu)Ct值。

【檢驗(yan)結(jie)果的(de)解(jie)釋(shi)】

【檢驗(yan)方(fang)法的局(ju)限(xian)性】

1. 當檢(jian)測(ce)樣本(ben)中被(bei)檢核(he)酸(suan)濃(nong)度(du)低(di)於(yu)本(ben)試劑(ji)盒的(de)最di檢出(chu)限shi可(ke)能(neng)會發生(sheng)假陰(yin)性的(de)結(jie)果。

2. 被(bei)檢樣(yang)本(ben)在(zai)采(cai)集(ji)、運(yun)輸、儲存以及處理過程(cheng)中操作方(fang)式(shi)不(bu)當容(rong)易(yi)造成RNA降解(jie)而(er)產(chan)生(sheng)假陰(yin)性結(jie)果。

3. 樣本(ben)在(zai)采(cai)集(ji)、運(yun)輸、儲存以及處理過程(cheng)中發生(sheng)交叉汙染(ran)，則容(rong)易得(de)到假陽性結(jie)果。

【產(chan)品(pin)性能(neng)指標(biao)】 產(chan)品(pin)的(de)最di檢出(chu)限(xian)為(wei)10³ Copies/mL，產(chan)品(pin)CV值≤3%。

【註意事項】

1. 使(shi)用本(ben)試劑(ji)盒的(de)實(shi)驗室，應嚴(yan)格按(an)照(zhao)國(guo)家(jia)有(you)關(guan)部分頒布(bu)的有(you)關(guan)基因(yin)擴增(zeng)檢(jian)驗實(shi)驗室管理(li)規範(fan)進行管理(li)；

2. 為(wei)避(bi)免RNA降解(jie)，樣(yang)本(ben)處理過程(cheng)應在(zai)0-4℃條(tiao)件(jian)下(xia)操作，且完成實(shi)驗後立即(ji)上機(ji)檢(jian)測；樣本處理過程(cheng)中使(shi)用的(de)器具耗(hao)材應經(jing)過無(wu)核酶(mei)處理；

3. 各區域物品均(jun)為(wei)專(zhuan)用，不(bu)得(de)交叉使(shi)用，以免汙染(ran)；檢測(ce)結(jie)束(shu)後，應(ying)立即(ji)對(dui)工(gong)作臺(tai)清(qing)潔(jie)；

4. 吸(xi)取(qu)反(fan)應液時，應盡量避(bi)免產(chan)生(sheng)氣泡；上 PCR 儀前(qian)，應(ying)註意檢查各(ge)反(fan)應管(guan)是否蓋緊，以免液體(ti)蒸發造成結(jie)果不(bu)準確(que)；

5. 試劑(ji)盒所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)在(zai)使(shi)用前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分(fen)融化混勻，並應(ying)瞬(shun)時離心；

6. 試劑(ji)盒內(nei)所(suo)配(pei)陰(yin)性和陽性對(dui)照(zhao)在(zai)第(di)壹(yi)次(ci)使(shi)用前(qian)應(ying)全(quan)部轉移至(zhi)標(biao)本準(zhun)備(bei)區，並單(dan)獨存放(fang)；

7. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒光(guang)幹(gan)擾(rao)，應(ying)避免裸手直接(jie)接(jie)觸(chu)PCR反(fan)應管(guan)，並應(ying)避(bi)免在(zai)PCR反(fan)應管(guan)上進行任何標(biao)記；

8. 檢測(ce)過程(cheng)中使(shi)用過的(de)吸(xi)頭(tou)，應直接(jie)打(da)到盛有 10%次(ci)氯酸的廢物缸內(nei)，檢(jian)測(ce)結(jie)束(shu)的(de)PCR 反(fan)應管(guan)，切忌(ji)開(kai)蓋，並與其他廢(fei)棄(qi)物品壹(yi)同滅(mie)菌後丟(diu)棄(qi)；工作臺(tai)及各種實(shi)驗用品(pin)應定(ding)期用 10%次(ci)氯酸、75%酒(jiu)精(jing)或紫(zi)外燈進行消毒；

9. 儀器擴增(zeng)相關(guan)參數(shu)應(ying)按(an)照(zhao)本(ben)說(shuo)明書相關(guan)要求進行設置(zhi)；不(bu)同批(pi)號試劑(ji)不(bu)能(neng)混用；並在(zai)有(you)效期內(nei)使(shi)用。