黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1ELISA試(shi)劑(ji)盒說明(ming)書(shu)

                                 黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1快速檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒

使(shi)用(yong)說(shuo)明(ming)書(shu)

【產(chan)品(pin)簡(jian)介(jie)】

黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)是壹類真(zhen)菌(jun)（如黃(huang)曲黴(mei)和寄生(sheng)曲黴(mei)）的(de)有(you)毒(du)的(de)代謝(xie)產(chan)物(wu)，它們具有(you)很(hen)強(qiang)的(de)致癌(ai)性(xing)，主要(yao)存(cun)在於谷(gu)物(wu)、堅(jian)果、棉(mian)籽(zi)以及(ji)壹些(xie)和(he)人類血(xue)液，動(dong)物(wu)飼料相(xiang)關的(de)產(chan)品(pin)中。其中黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1的(de)毒(du)性(xing)、致癌(ai)性(xing)、汙(wu)染(ran)頻率均(jun)居(ju)於首wei。薄層色譜壹直(zhi)是檢(jian)測(ce)黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)常(chang)用(yong)的(de)方法，但是此方法制備(bei)樣品及(ji)分析樣品時(shi)費(fei)時又(you)費(fei)力。而(er)使用(yong)黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1 ELISA試(shi)劑(ji)盒則能夠(gou)快(kuai)速而(er)準確的(de)分析樣品中黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1殘(can)留(liu)。參考(kao)國(guo)家標(biao)準GB/T 5009.22-2003。

【測(ce)定原理】

本(ben)試(shi)劑(ji)盒采用(yong)間(jian)接(jie)競爭ELISA方法，在微(wei)孔(kong)條上(shang)預包被(bei)偶(ou)聯(lian)抗原，樣本(ben)中的(de)殘(can)留(liu)物(wu)黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1和微(wei)孔(kong)條上(shang)預包被(bei)的(de)偶聯(lian)抗原競爭黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1抗體，加(jia)入酶(mei)標記物後(hou)，用(yong)TMB底(di)物顯(xian)色(se)，樣本(ben)吸光值與其所(suo)含(han)殘(can)留(liu)物(wu)黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1的(de)含(han)量(liang)成負(fu)相關(guan)，與標(biao)準曲線(xian)比較(jiao)可得出相應(ying)殘(can)留(liu)物(wu)黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1的(de)含(han)量(liang)。

【試(shi)劑(ji)盒技(ji)術(shu)指標】   

規       格：96孔(kong)/盒

靈(ling) 敏(min) 度(du)： 0.025ppb

檢(jian)測(ce)時間(jian)： 75min

樣本(ben)檢(jian)測(ce)下限：

大米、玉米、小(xiao)米………………………………2.5ppb

醬油、醋(cu)…………………………………………0.5ppb

食(shi)用(yong)油(you)……………………………………………2.5ppb

酒類（葡萄(tao)酒、啤(pi)酒、黃(huang)酒）…………………0.5ppb

花(hua)    生……………………………………………2.5ppb

月(yue)餅(bing)、桃酥(su)、花(hua)生(sheng)醬等……………………………1ppb

面    粉(fen)………………………………………………1ppb

壹般(ban)飼料…………………………………………2.5ppb

飼料（配(pei)合料及(ji)濃縮料(liao)）…………………………1ppb

牛(niu)奶(nai)………………………………………………0.5ppb

反(fan)應(ying)率：

黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1……………………………………100%

回收(shou)率(lv)：

食(shi)    品…………………………………………85±10%

飼    料…………………………………………75±10%

【試(shi)劑(ji)盒組成】   

1、 微(wei)量(liang)測(ce)試(shi)孔(kong)：每(mei)條8孔(kong)，壹板12條

2、 標準溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.025ppb、0.075ppb、0.225ppb、0.675ppb、2.025ppb

3、 酶標記物       12ml…………………………紅色帽

4、 抗體工(gong)作(zuo)液     7ml…………………………綠色帽

5、 底(di)物液 A液    7ml…………………………棕色帽

6、 底(di)物液 B液    7ml…………………………黑色帽

7、 終(zhong) 止 液          7ml…………………………黃(huang)色帽(mao)

8、 20X濃縮洗(xi)滌液40ml……………………白色帽

9、 2X濃縮復溶液  50 ml…………………… 藍(lan)色(se)帽(mao)

【所(suo)用(yong)儀器(qi)、試(shi)劑(ji)】   

儀          器(qi)：微(wei)孔(kong)板酶標(biao)儀450nm/630nm、旋轉蒸(zheng)發儀/

                     氮氣(qi)吹幹(gan)裝(zhuang)置、均(jun)質(zhi)器(qi)、振(zhen)蕩(dang)器(qi)、離心機(ji)、

                     刻度(du)移液管、天(tian)平（感量(liang)0.01g ）

微(wei)量(liang)移液器(qi)：單(dan)道(dao) 20µl～200µl、100µl～1000µl、多道 250µl

試(shi)           劑：甲醇、三氯(lv)甲(jia)wan、正己(ji)烷(wan)、濾紙

【實(shi)驗(yan)前(qian)溶液配(pei)制(zhi)】

配(pei)液1、50%甲醇溶液：

 50ml蒸(zheng)餾水或(huo)去離子(zi)水和(he)50ml純甲醇混合制備(bei)50％甲醇溶液。

配(pei)液2、將(jiang)2×濃縮復溶液用(yong)去離子(zi)水按(an)照(zhao)1：1稀釋(shi)（1份濃縮復溶液+1份去離子(zi)水）用(yong)於樣(yang)品的(de)稀釋(shi)。

配(pei)液3、將(jiang)40ml濃縮洗(xi)滌液（20倍濃縮）用(yong)去離子(zi)水按(an)照(zhao)1：19稀釋(shi)（1份濃縮洗(xi)滌液+19份去離子(zi)水），或(huo)按(an)所(suo)需(xu)用(yong)量(liang)配(pei)制(zhi)洗(xi)滌(di)液。

【樣本(ben)前(qian)處理步驟】   

處理任何(he)樣(yang)本(ben)時，都必須註意：

（1）實(shi)驗(yan)中須使(shi)用(yong)壹次(ci)性(xing)吸頭，在吸取不(bu)同(tong)的(de)試(shi)劑(ji)時要更換(huan)吸頭

（2）實(shi)驗(yan)之前(qian)須(xu)檢(jian)查(zha)實(shi)驗(yan)器(qi)具是否(fou)幹(gan)凈，必要時可對(dui)實(shi)驗(yan)器(qi)具進(jin)行清潔，以避(bi)免(mian)汙(wu)染(ran)幹(gan)擾實(shi)驗(yan)結果。

壹、食(shi)品

（a）脂(zhi)肪(fang)含(han)量(liang)小(xiao)的(de)固體(ti)樣(yang)品(pin)(如大米、玉米、小(xiao)米等)

1、稱取1g粉(fen)碎(sui)的(de)樣品(pin)於50ml離心管中，加入10ml的(de)50%甲醇溶液混(hun)合；強(qiang)力振(zhen)蕩(dang)5min。

2、用(yong)Whatman No.濾紙過(guo)濾；收(shou)集(ji)過(guo)濾液。

3、取出上(shang)清液50ul與稀釋(shi)後(hou)的(de)復溶液450ul 充分混合30s

      取50ul進(jin)行分析。

          樣本(ben)稀釋(shi)倍(bei)數(shu):100

(b)醬油、醋(cu)

1、稱取2g樣品於50ml離心管中；先(xian)加(jia)入3ml去離子(zi)水充(chong)分混勻，再(zai)加(jia)入10ml三氯(lv)甲(jia)wan，振(zhen)蕩(dang)5min，室溫4000r/min以上(shang)，離(li)心(xin)10min；

2、取出下層5ml的(de)三氯(lv)甲(jia)wan到另壹潔(jie)凈容(rong)器(qi)中於50℃水浴(yu)中氮氣(qi)/空氣吹幹(gan)。

3、加入1mL的(de)50%甲醇溶液將(jiang)充(chong)分溶解幹(gan)燥物。

4、取50ul與稀釋(shi)後(hou)的(de)復溶液950ul 充分混合30s，

      取50ul進(jin)行分析。

          樣本(ben)稀釋(shi)倍(bei)數(shu):20

(c)食(shi)用(yong)油(you)(如(ru)菜油、麻(ma)油(you)、色(se)拉油、花(hua)生(sheng)油等)

1、稱取1g油樣品於10ml離心管中，先(xian)加入2ml 正己(ji)烷(wan)，再(zai)加(jia)入5ml的(de)50%甲醇溶液混(hun)合；強(qiang)力振(zhen)蕩(dang)5min；室溫4000r/min以上(shang)，離(li)心(xin)10min。

2、取下層溶液50ul與稀釋(shi)後(hou)的(de)復溶液200ul 充分混合30s

      取50ul進(jin)行分析。

     樣本(ben)稀釋(shi)倍(bei)數(shu):25

(d)酒類（葡萄(tao)酒、啤(pi)酒、黃(huang)酒）

1、稱取2g酒樣(yang)品(pin)於50ml離心管中；加入10ml三氯(lv)甲(jia)wan，振(zhen)蕩(dang)5min，室溫4000r/min以上(shang)，離(li)心(xin)10min；

2、取出下層5ml的(de)三氯(lv)甲(jia)wan到另壹潔(jie)凈容(rong)器(qi)中於50℃水浴(yu)中氮氣(qi)/空氣吹幹(gan)。

3、加入1mL的(de)50%甲醇溶液將(jiang)充(chong)分溶解幹(gan)燥物。

4、取50ul與稀釋(shi)後(hou)的(de)復溶液950ul 充分混合30s，

      取50ul進(jin)行分析。

      樣本(ben)稀釋(shi)倍(bei)數(shu):20

(b)花(hua)生(sheng)

1、稱取1g粉(fen)碎(sui)的(de)樣品(pin)於50ml離心管中，先(xian)加入5ml 正己(ji)烷(wan)，再(zai)加(jia)入10ml的(de)50%甲醇溶液混(hun)合；強(qiang)力振(zhen)蕩(dang)5min；室溫4000r/min以上(shang)，離(li)心(xin)10min。

2、取下層溶液50ul與稀釋(shi)後(hou)的(de)復溶液450ul 充分混合30s

      取50ul進(jin)行分析。

     樣本(ben)稀釋(shi)倍(bei)數(shu):100

(e)月(yue)餅(bing)、桃酥(su)、花(hua)生(sheng)醬等

1、稱取2g粉(fen)碎(sui)的(de)樣品(pin)於50ml離心管中，先(xian)加入5ml 正己(ji)烷(wan)，再(zai)加(jia)入10ml的(de)50%甲醇溶液混(hun)合；強(qiang)力振(zhen)蕩(dang)5min；室溫4000r/min以上(shang)，離(li)心(xin)10min。

2、取下層5mL提取液於50ml離心管中；加入10ml三氯(lv)甲(jia)wan，振(zhen)蕩(dang)5min，室溫4000r/min以上(shang)，離(li)心(xin)10min。

3、取出下層5ml的(de)三氯(lv)甲(jia)wan到另壹潔(jie)凈容(rong)器(qi)中於50℃水浴(yu)中氮氣(qi)/空氣吹幹(gan)。

4、加入1mL的(de)50%甲醇溶液將(jiang)充(chong)分溶解幹(gan)燥物。

5、取50ul與稀釋(shi)後(hou)的(de)復溶液950ul 充分混合30s，

      取50ul進(jin)行分析。

          樣本(ben)稀釋(shi)倍(bei)數(shu):40倍

(f)面粉(fen)

1、稱取2g面粉(fen)樣品(pin)於50ml離心管中，再(zai)加(jia)入10ml的(de)50%甲醇溶液混(hun)合；強(qiang)力振(zhen)蕩(dang)5min；

2、用(yong)Whatman No.濾紙過(guo)濾；收(shou)集(ji)過(guo)濾液。

3、取過(guo)濾溶液5mL於50ml離心管中；加入10ml三氯(lv)甲(jia)wan，振(zhen)蕩(dang)5min，室溫4000r/min以上(shang)，離(li)心(xin)10min。

4、取出下層5ml的(de)三氯(lv)甲(jia)wan到另壹潔(jie)凈容(rong)器(qi)中於50℃水浴(yu)中氮氣(qi)/空氣吹幹(gan)。

5、加入1mL的(de)50%甲醇溶液將(jiang)充(chong)分溶解幹(gan)燥物。

6、取50ul與稀釋(shi)後(hou)的(de)復溶液950ul 充分混合30s，

      取50ul進(jin)行分析。

       樣本(ben)稀釋(shi)倍(bei)數(shu):40倍

二(er)、飼料

(a)壹般(ban)飼料及(ji)原料（脂(zhi)肪(fang)和蛋(dan)白(bai)含(han)量(liang)小(xiao)的(de)飼料)

1、稱取1g粉(fen)碎(sui)的(de)樣品(pin)於50ml離心管中，加入10ml 的(de)50%甲醇溶液混(hun)合；強(qiang)力振(zhen)蕩(dang)5分鐘(zhong)。

2、用(yong)Whatman No.濾紙過(guo)濾；收(shou)集(ji)過(guo)濾液。

3、取出上(shang)清液50ul與稀釋(shi)後(hou)的(de)復溶液450ul 充分混合30s

      取50ul進(jin)行分析。

          樣本(ben)稀釋(shi)倍(bei)數(shu):100

(b)配(pei)合料及(ji)濃縮料(liao)（脂(zhi)肪(fang)和蛋(dan)白(bai)含(han)量(liang)高(gao)的(de)飼料)

1、稱取2g樣品於50ml離心管中，再(zai)加(jia)入10ml的(de)50%甲醇溶液混(hun)合；強(qiang)力振(zhen)蕩(dang)5min；

2、用(yong)Whatman No.濾紙過(guo)濾；收(shou)集(ji)過(guo)濾液。

3、取過(guo)濾溶液5mL於50ml離心管中；加入10ml三氯(lv)甲(jia)wan，振(zhen)蕩(dang)5min，室溫4000r/min以上(shang)，離(li)心(xin)10min。

4、取出下層5ml的(de)三氯(lv)甲(jia)wan到另壹潔(jie)凈容(rong)器(qi)中於50℃水浴(yu)中氮氣(qi)/空氣吹幹(gan)。

5、加入1mL的(de)50%甲醇溶液將(jiang)充(chong)分溶解幹(gan)燥物。

6、取50ul與稀釋(shi)後(hou)的(de)復溶液950ul 充分混合30s，

      取50ul進(jin)行分析。

      樣本(ben)稀釋(shi)倍(bei)數(shu):40倍

三、乳(ru)制(zhi)品(pin)

(a)生鮮牛(niu)奶(nai)；

     1、直接取50µl牛(niu)奶(nai)+950µl稀釋(shi)後(hou)的(de)復溶液混合30s；

     2、取50µl用(yong)於檢(jian)測(ce)檢(jian)測(ce)分析。

          樣本(ben)稀釋(shi)倍(bei)數(shu):20

(b)奶(nai)粉(fen)、奶(nai)油、奶(nai)酪

1、稱取5g樣品於50ml離心管中，加入10ml甲醇，強(qiang)力振(zhen)蕩(dang)5min；室溫4000r/min以上(shang)，離(li)心(xin)10min。

2、取2ml上(shang)清液，於50℃水浴(yu)中氮氣(qi)/空氣吹幹(gan)。

3、用(yong)1ml正己(ji)烷(wan)溶解殘(can)留(liu)物(wu)，加入1ml稀釋(shi)後(hou)的(de)復溶液混合30s；室溫4000r/min以上(shang)，離(li)心(xin)5min，

4、取50ul下層溶液進(jin)行檢(jian)測(ce)分析。

     樣本(ben)稀釋(shi)倍(bei)數(shu):1

【備(bei)註】

       如根據(ju)樣品(pin)的(de)國(guo)家允(yun)許量(liang)標(biao)準判定（詳(xiang)見附(fu)件表），在樣品(pin)測(ce)定前(qian)，用(yong)稀釋(shi)後(hou)的(de)復溶液將(jiang)樣(yang)品提(ti)取液再(zai)進(jin)壹步(bu)進(jin)行適當(dang)倍數(shu)稀釋(shi)，即為(wei)待(dai)測(ce)樣品(pin)液； 取50ul待(dai)測(ce)樣品(pin)液進(jin)行定量(liang)或(huo)限liang測(ce)ding。

【酶標免疫分析程(cheng)序(xu)】

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)：

1、 將(jiang)所(suo)需(xu)試(shi)劑(ji)從(cong)冷(leng)藏環(huan)境中取出，置室(shi)溫(wen)（20-25℃）平衡30min以上(shang)，註意每(mei)種(zhong)液體試(shi)劑(ji)使用(yong)前(qian)均(jun)須(xu)搖勻。

2、 按(an)板架(jia)及(ji)需(xu)要(yao)取出微(wei)孔(kong)條，將(jiang)不(bu)用(yong)的(de)微(wei)孔(kong)放入自封袋，保存(cun)於2-8℃。

3、 編(bian)號：將(jiang)樣(yang)本(ben)和標準品對應(ying)微(wei)孔(kong)按(an)序編(bian)號每(mei)個(ge)樣本(ben)和標準品做2孔(kong)平行，並記錄(lu)標(biao)準孔(kong)和(he)樣(yang)本(ben)孔(kong)所(suo)在的(de)位置。

4、 加標準品/樣本(ben)50µl/孔(kong)到各自的(de)微(wei)孔(kong)中，然(ran)後(hou)加(jia)抗體50µl/孔(kong)，用(yong)蓋(gai)板膜(mo)封板，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混勻。25℃環(huan)境中反(fan)應(ying)30min。

5、 取出將(jiang)孔(kong)內(nei)液體(ti)甩幹(gan)，用(yong)洗(xi)液250µl/孔(kong)洗(xi)板4-5次，每次間隔(ge)15-30秒，用(yong)吸水紙(zhi)拍幹(gan)（拍幹(gan)後(hou)未被(bei)清除的(de)氣泡可用(yong)幹(gan)凈的(de)槍(qiang)頭刺破(po)）。

6、 每孔(kong)加(jia)入酶標記物100µl，蓋板膜(mo)蓋(gai)板後(hou)置25℃環(huan)境中反(fan)應(ying)30min。將(jiang)孔(kong)內(nei)液體(ti)甩幹(gan)，用(yong)洗(xi)滌(di)液充(chong)分洗，4-5遍(bian)（同(tong)上(shang)），用(yong)吸水紙(zhi)拍幹(gan)（拍幹(gan)後(hou)未被(bei)清除的(de)氣泡可用(yong)幹(gan)凈的(de)槍(qiang)頭刺破(po)）。

7、  顯(xian)色(se)：每孔(kong)加(jia)入A液50µl，再(zai)加(jia)B液50µl，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混勻，25℃環(huan)境中避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)15min。

8、 測(ce)定：每(mei)孔(kong)加(jia)入終(zhong)止液50µl，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)，設定酶標(biao)儀於450nm處（建(jian)議(yi)用(yong)雙(shuang)波(bo)長(chang)450/630nm檢(jian)測(ce),在5min內(nei)讀(du)完(wan)數(shu)據(ju)）測(ce)定吸光度(du)值（OD值）。

【結果判定(ding)】

結果判定(ding)有(you)兩(liang)種方(fang)法，粗略(lve)判(pan)定可用(yong)第1種方法，定量(liang)判(pan)定(ding)用(yong)第2種(zhong)方(fang)法。註意樣(yang)本(ben)吸光值與黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1的(de)含(han)量(liang)成負(fu)相關(guan)

1、粗略(lve)判(pan)定：

用(yong)樣(yang)品(pin)的(de)平均(jun)吸光度(du)值與標準值比較(jiao)即可得出樣本(ben)所(suo)含(han)M1濃度(du)範(fan)圍（ng/ml）。假設樣品1的(de)吸光度(du)值為(wei)0.248，樣品2的(de)吸光度(du)值為(wei)1.021，標準液吸光度(du)值分別是：0ppb為(wei)1.821；0.025ppb為(wei)1.434；0.075ppb為(wei)1.163； 0.225ppb為(wei)0.767； 0.675ppb為(wei)0.298； 2.025ppb為(wei)0.106。則樣品1的(de)濃度(du)範(fan)圍0.675ppb-2.025ppb；樣品2的(de)濃度(du)範(fan)圍0.075ppb-0.0.225ppb。乘以其對應(ying)的(de)稀釋(shi)倍(bei)數(shu)即為(wei)樣(yang)本(ben)中黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1的(de)實(shi)際含(han)量(liang)。

2、定量(liang)判(pan)定(ding)：

所(suo)獲(huo)得的(de)每個(ge)濃度(du)標(biao)準溶液和(he)樣(yang)本(ben)吸光度(du)值的(de)平均(jun)值（B）除以第壹個(ge)標(biao)準（0標準）的(de)吸光度(du)值（B₀）再(zai)乘以100%，即百(bai)分吸光度(du)值。

B—標準溶液或(huo)樣(yang)本(ben)溶液的(de)平均(jun)吸光度(du)值

B₀—0ng/ml標準溶液的(de)平均(jun)吸光度(du)值

以標準品百分吸光率(lv)為(wei)縱(zong)坐(zuo)標(biao)，以黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1標準品濃度(du)（ng/ml）的(de)半對(dui)數(shu)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)，繪(hui)制標(biao)準曲線(xian)圖。將(jiang)樣(yang)本(ben)的(de)百分吸光率(lv)代(dai)入標(biao)準曲線(xian)中，從(cong)標(biao)準曲線(xian)上(shang)讀(du)出樣本(ben)所(suo)對應(ying)的(de)濃度(du)，乘以其對應(ying)的(de)稀釋(shi)倍(bei)數(shu)即為(wei)樣(yang)本(ben)中黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1實(shi)際濃度(du)。

若利用(yong)試(shi)劑(ji)盒專業(ye)分析軟件進(jin)行計算(suan)，更便(bian)於大量(liang)樣(yang)品(pin)的(de)準確、快速分析。

3、標準準曲線(xian)：

B/B0 (%)

       0.025     0.075       0.225     0.675     2.025

                  黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1(ppb) [µg/kg]

圖1：黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒的(de)回歸(gui)曲線(xian)

4、再(zai)現性(xing)：

%CV

         0     0.025   0.075     0.225   0.675   2.025

                                黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1 (ppb) [µg/kg]

圖2：黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒的(de)精密(mi)度(du)

由多個不(bu)同(tong)的(de)實(shi)驗(yan)結果確定(ding)了精密(mi)度(du)，圖(tu)2顯(xian)示(shi)出黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒的(de)精密(mi)度(du)情(qing)況(kuang)，獲(huo)得的(de)標準吸收(shou)值的(de)變異(yi)系數（%CV）對相應(ying)黃(huang)曲黴(mei)毒(du)素(su)B1濃度(du)作(zuo)曲線(xian)，可以看到在全部範(fan)圍內(nei)變(bian)異(yi)系數如(ru)此之低，可以得到很(hen)好的(de)再(zai)現性(xing)。

【註意事(shi)項(xiang)】

1、 使用(yong)前(qian)將(jiang)所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)溫度(du)回(hui)升(sheng)至室(shi)溫20-25℃。試(shi)劑(ji)及(ji)標本(ben)沒(mei)有(you)回到(dao)室(shi)溫(wen)（20-25℃）會(hui)導(dao)致所(suo)有(you)標準的(de)OD值偏低。

2、 在洗板過(guo)程(cheng)中如果(guo)出現板孔(kong)幹(gan)燥的(de)情況(kuang)，則會(hui)伴(ban)隨(sui)著出現標(biao)準曲線(xian)不(bu)成線(xian)性(xing)，重(zhong)復性(xing)不(bu)好的(de)現象(xiang)。所(suo)以洗板拍幹(gan)後(hou)應(ying)立(li)即進(jin)行下壹步(bu)操(cao)作(zuo)。

3、 混合要均(jun)勻，否(fou)則會(hui)出現重(zhong)復性(xing)不(bu)好的(de)現象(xiang)。

4、 反(fan)應(ying)終(zhong)止液為(wei)2M硫酸(suan)，避(bi)免(mian)接(jie)觸皮膚。

5、 不(bu)要使(shi)用(yong)過(guo)了(le)有(you)效日(ri)期(qi)的(de)試(shi)劑(ji)盒，稀釋(shi)或(huo)攙(chan)雜(za)使(shi)用(yong)會(hui)引(yin)起靈(ling)敏(min)度(du)、OD值的(de)變化(hua)。不(bu)要交(jiao)換(huan)使用(yong)不(bu)同(tong)批號的(de)盒中試(shi)劑(ji)。

6、 不(bu)用(yong)的(de)微(wei)孔(kong)板放進(jin)自封袋密(mi)封；標準物質(zhi)和(he)無(wu)色的(de)發色(se)劑(ji)對(dui)光敏(min)感，因此要避(bi)免(mian)直(zhi)接(jie)暴露在光線(xian)下。

7、 顯(xian)色(se)液若(ruo)有(you)任何(he)顏色(se)表明(ming)變質(zhi)，應(ying)當(dang)棄之。0標準的(de)吸光度(du)值小(xiao)於0.5個單位（A_450nm< 0.5 ）時，表示(shi)試(shi)劑(ji)可能(neng)變質(zhi)。

8、 該試(shi)劑(ji)盒最(zui)佳反(fan)應(ying)溫度(du)為(wei)25℃，溫度(du)過(guo)高(gao)或(huo)過(guo)低將(jiang)導(dao)致檢(jian)測(ce)吸光度(du)值和靈(ling)敏(min)度(du)發(fa)生(sheng)變化(hua)。

【儲(chu)存】

原包裝(zhuang)應(ying)儲(chu)存於2～8℃保鮮冷(leng)藏，切勿(wu)冷(leng)凍。

【有(you)效期(qi)】

        有(you)效期(qi)12個月(yue);生產(chan)日(ri)期(qi)、有(you)效期(qi)、生(sheng)產(chan)批(pi)號見外(wai)包裝(zhuang)。