地(di)塞(sai)米松ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)簡介(jie)

地(di)塞(sai)米松快速(su)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

使(shi)用說(shuo)明(ming)書

【原理(li)】

本試(shi)劑(ji)盒(he)是(shi)利用競爭ELISA方(fang)法(fa)，在(zai)酶(mei)標(biao)板(ban)微孔上(shang)預包被抗 地(di)塞(sai)米松抗原。檢(jian)測時，加入(ru)標(biao)準品(pin)或(huo)樣品(pin)溶液，地(di)塞(sai)米松抗體(ti)及(ji)酶(mei)標(biao)記(ji)物(wu)，包被抗原和加入(ru)樣本(ben)中(zhong)的地(di)塞(sai)米松競爭性地(di)與地(di)塞(sai)米松抗體(ti)結合(he)後，再(zai)與(yu)酶標(biao)記(ji)物(wu)形(xing)成(cheng)抗原抗(kang)體(ti)復(fu)合(he)物，用(yong)TMB底物(wu)顯(xian)色；加入(ru)反應(ying)終止(zhi)液，在(zai)450nm波長酶(mei)標(biao)儀下進(jin)行檢(jian)測，樣品(pin)中(zhong)的地(di)塞(sai)米松濃(nong)度(du)與吸收光(guang)強度(du)成(cheng)反比(bi)。

【適(shi)用(yong)範(fan)圍(wei)】

本試(shi)劑(ji)盒(he)是(shi)應(ying)用ELISA技(ji)術(shu)研發(fa)的(de)藥(yao)物殘(can)留檢(jian)測產(chan)品(pin),與儀器分析技(ji)術(shu)比較(jiao)，能(neng)經(jing)濟、快(kuai)速(su)地(di)檢測出肌肉(rou)、肝臟(zang)等中(zhong)的地(di)塞(sai)米松類(lei)藥物(wu)。

【試(shi)劑(ji)盒(he)技(ji)術(shu)指(zhi)標(biao)】  

規      格：96孔/盒

靈 敏 度(du)： 0.1ppb

檢測時間： 75min

樣本(ben)檢(jian)測下限(xian)：

組(zu)織(zhi)、蜂蜜………………………………………… 0.2ppb

牛奶(nai)………………………………………………… 4ppb

樣本(ben)回(hui)收率(lv)

組(zu)織(zhi)、蜂蜜……………………………………80% ±10%

牛奶(nai)……………………………………………85% ±10%

交(jiao)叉(cha)反應(ying)率

地(di)塞(sai)米松………………………………………………100%

倍他(ta)米松………………………………………………80%

氟美(mei)松…………………………………………………55%

氫化可的(de)松……………………………………………6%

皮(pi)質酮…………………………………………小(xiao)於0.1%

【試(shi)劑(ji)盒(he)組(zu)成(cheng)】  

1、 微量(liang)測試(shi)孔(kong)：1×96孔板(ban)（12條(tiao)×8孔）

2、 標(biao)準品(pin)溶液×6瓶(ping)：（1ml/瓶(ping)）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb

3、 高濃(nong)度(du)標(biao)準品(pin)：×1瓶(ping)：（1ml/瓶(ping)）100ppb

4、 酶標(biao)記(ji)物(wu)       12ml………………………紅色帽(mao)

5、 抗體(ti)工作(zuo)液(ye)   7ml ………………………綠色帽(mao)

6、 底物(wu)A液      7ml ………………………棕色帽(mao)

7、 底物(wu)B液     7ml  ……………………黑(hei)色帽(mao)

8、 終  止(zhi)  液     7ml  ……………………黃(huang)色帽(mao)

9、 20X濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液(ye)40 ml  ………………白色帽(mao)

10、 2X 濃(nong)縮(suo)復(fu)溶液   50ml ·………………藍(lan)色帽(mao)

【所用(yong)儀器、試(shi)劑(ji)】  

儀          器：微孔板(ban)酶(mei)標(biao)儀450nm/630nm、旋轉(zhuan)蒸(zheng)發(fa)儀/氮(dan)氣吹幹裝(zhuang)置(zhi)、均質(zhi)器、振蕩器、離心機(ji)、 刻(ke)度(du)移液(ye)管(guan)、天平(ping)（感量(liang)0.01g ）

微量(liang)移(yi)液(ye)器：單道(dao) 20µl～200µl、100µl～1000µl、多(duo)道(dao) 250µl

試(shi)           劑：乙酸乙酯、NaOH、正(zheng)己(ji)烷(wan)

【實驗(yan)前(qian)溶液配制】

配液1、0.1M氫氧化鈉(na)溶液

         稱0.4gNaOH加去(qu)離子水混(hun)勻(yun)溶解，定(ding)容至100ml

配液2、將2X濃(nong)縮(suo)復(fu)溶液用(yong)去(qu)離子水按照1：1稀釋(shi)（1 份(fen)濃(nong)縮(suo)復(fu)

溶液+1份(fen)去(qu)離子水）用於(yu)樣本(ben)的(de)復(fu)溶。

配液3、將40ml濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液(ye)（20倍濃(nong)縮(suo)）用去(qu)離子水按照 1：19

稀釋(shi)（1份(fen)濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液(ye)+19份(fen)去(qu)離水）; 或(huo)按所(suo)需(xu)用量(liang)配制

洗滌(di)液(ye)

【樣本(ben)前(qian)處(chu)理(li)步驟】  

處(chu)理(li)任何樣本(ben)時(shi)，都(dou)必須註意(yi)：

（1）實驗(yan)中(zhong)必須使用壹次性吸頭(tou)，在(zai)吸取(qu)不同的試(shi)劑(ji)時(shi)要(yao)更換(huan)吸頭(tou)。

（2）實驗(yan)之(zhi)前須檢查實驗(yan)器具是(shi)否幹(gan)凈(jing)，必要時(shi)可對實驗(yan)器具進行清(qing)潔，以避(bi)免汙(wu)染幹擾(rao)實驗(yan)結(jie)果(guo)。

（a ）動物(wu)組(zu)織(zhi)、蜂蜜

1、稱2.0±0.05g 均質(zhi)過的(de)樣本(ben)於(yu)50ml離心管(guan)中(zhong)；

2、加入(ru)3ml 0.1M氫氧化鈉(na)溶液，充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)1分鐘(zhong)

3、加入(ru)4 ml乙酸乙酯充(chong)分(fen)振蕩5分鐘(zhong)，室(shi)溫(wen)4000r/min，離心10分鐘(zhong)；

4、取(qu)2ml清(qing)澈上(shang)層有機相至幹(gan)凈(jing)玻(bo)璃試(shi)管(guan)中(zhong)，56℃水浴(yu)氮(dan)氣/空(kong)氣吹幹；

5、加1ml正(zheng)已(yi)烷(wan)振蕩30秒，再(zai)加入(ru)1ml復(fu)溶工作(zuo)液(ye)充(chong)分(fen)振蕩混(hun)合(he)30秒；室(shi)溫(wen)4000轉(zhuan)/分，離心5分鐘(zhong)；

6、去(qu)除(chu)上(shang)層有機(ji)相，取(qu)下(xia)層(ceng)50µl液體(ti)用於(yu)分析

     樣本(ben)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數：1

（b）牛奶(nai)樣品(pin)處(chu)理(li)方(fang)法(fa)

脫脂牛(niu)奶(nai)

1、取(qu)出(chu)50μl 脫脂牛(niu)奶(nai)於另壹試(shi)管(guan)中(zhong)，加入(ru)1950μl樣本(ben)稀(xi)

  釋(shi)液(ye)，混(hun)合(he)30s；

2、取(qu)50 μl 用於(yu)分析

脂肪奶

3、確吸取(qu)1ml 牛奶(nai)樣本(ben)於(yu)離心管(guan)中(zhong)；於15℃環境

3000r/min，離心10min；（如果(guo)沒(mei)有(you)冷(leng)凍(dong)離心機(ji)請預(yu)

先冷(leng)卻(que)後(hou)再(zai)離心)

4、取(qu)出(chu)50μl 牛奶(nai)於另壹試(shi)管(guan)中(zhong)，加入(ru)1950μl樣本(ben)稀(xi)

  釋(shi)液(ye)，混(hun)合(he)30s；

5、取(qu)50 μl 用於(yu)分析

  樣本(ben)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數: 40 倍

【酶標(biao)免疫(yi)分(fen)析程序】  

操作(zuo)步驟：

1、 從4℃冷藏(zang)環境中(zhong)取(qu)出(chu)所(suo)需(xu)試(shi)劑(ji)，置(zhi)室(shi) 溫(wen)（20-25℃）平(ping)衡(heng)30min以上(shang)，註意(yi)每種(zhong)液(ye)體(ti)試(shi)劑(ji)使(shi)用(yong)前(qian)均須搖勻(yun)。

2、 取(qu)出(chu)框架及(ji)需(xu)要數量(liang)的(de)微孔，將(jiang)不用的(de)微孔放(fang)入(ru)自封袋，保存(cun)於(yu)2-8℃。

3、 編號：將(jiang)樣本(ben)和標(biao)準品(pin)對應(ying)微孔按(an)序(xu)編號，每個(ge)樣本(ben)和標(biao)準品(pin)做2孔平(ping)行，並記(ji)錄(lu)標(biao)準孔(kong)和樣本(ben)孔(kong)所(suo)在(zai)的(de)位(wei)置(zhi)

4、 加標(biao)準品(pin)或(huo)樣本(ben)50µl/孔到各(ge)自的(de)微孔中(zhong)，然後加抗體(ti)50µl/孔，用蓋(gai)板(ban)膜(mo)封板(ban)，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun)。25℃環境中(zhong)反應(ying)30min。

5、 取(qu)出(chu)將(jiang)孔(kong)內(nei)液體(ti)甩(shuai)幹，用洗(xi)液250µl /孔，洗(xi)板(ban)4－5次，每次間隔15-30s，用吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹(gan)（拍(pai)幹(gan)後未被清(qing)除(chu)的氣(qi)泡(pao)可(ke)用幹(gan)凈(jing)的(de)槍(qiang)頭(tou)刺(ci)破(po)）。

6、 每孔(kong)加入(ru)酶標(biao)記(ji)物(wu)100µl，蓋板(ban)膜(mo)蓋(gai)板(ban)後(hou)置25℃環境中(zhong)反應(ying)30min。重復(fu)步驟6。

7、 顯色：每孔(kong)加入(ru)底物(wu)液(ye)A液50µl， 再(zai)加B液50µl，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun)，25℃環境中(zhong)避光(guang)顯色15min。

8、 測定：每孔(kong)加入(ru)終止(zhi)液50µl，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun)，設定酶標(biao)儀於450nm處(chu)（建(jian)議用(yong)雙(shuang)波(bo)長450/630nm檢測，在(zai)5min內讀完(wan)數據），測定每孔(kong)吸光(guang)度(du)值(zhi)（OD值(zhi)）。

【結果(guo)判(pan)定(ding)】  

結果(guo)判(pan)定(ding)有兩(liang)種方(fang)法(fa)，粗略判(pan)定(ding)可用(yong)第(di)1種方(fang)法(fa)，定量(liang)判(pan)定(ding)用第(di)2種方(fang)法(fa)。註意(yi)樣本(ben)吸光(guang)值(zhi)與其(qi)所含(han)地(di)塞(sai)米松成(cheng)負相關(guan)

1、粗略判(pan)定(ding)

用樣本(ben)的(de)平(ping)均(jun)吸光(guang)度(du)值(zhi)與標(biao)準吸光(guang)度(du)值(zhi)比較(jiao)即可(ke)得(de)出(chu)其(qi)濃(nong)度(du)範(fan)圍(wei)(ppb)。假設樣本(ben)1的吸光(guang)度(du)值(zhi)為0.310， 樣本(ben)2的吸光(guang)度(du)值(zhi)為0.820，標(biao)準液(ye)吸光(guang)度(du)值(zhi)分別(bie)是(shi)：0ppb為1.610；0.1ppb為1.350；0.3ppb為1.030；0.9ppb為0.720； 2.7ppb為0.359；8.1ppb為0.198。則樣本(ben)1的濃(nong)度(du)範(fan)圍(wei)是(shi)2.7ppb-8.1ppb； 樣本(ben)2的濃(nong)度(du)範(fan)圍(wei)是(shi)0.3 ppb-0.9 ppb。乘以(yi)其(qi)對應(ying)的稀(xi)釋(shi)倍(bei)數即為(wei)樣本(ben)中(zhong)地(di)塞(sai)米松實際(ji)含(han)量(liang)。

2、定量(liang)分(fen)析

（1）百分(fen)吸光(guang)率的(de)計算(suan)，標(biao)準品(pin)或(huo)樣本(ben)的(de)百(bai)分吸光(guang)率等於標(biao)準品(pin)或(huo)樣本(ben)的(de)百(bai)分吸光(guang)度(du)值(zhi)的平(ping)均(jun)值(zhi)（雙孔(kong)）除(chu)以第(di)壹個(ge)標(biao)準（0標(biao)準）的(de)吸光(guang)度(du)值(zhi)，再(zai)乘(cheng)以100%，即：

B—標(biao)準溶液或(huo)樣本(ben)溶液的(de)平(ping)均(jun)吸光(guang)度(du)值(zhi)

B₀—0ng/ml標(biao)準溶液的(de)平(ping)均(jun)吸光(guang)度(du)值(zhi)

（2）標(biao)準曲(qu)線(xian)的繪(hui)制與計算(suan)

以標(biao)準品(pin)百分(fen)吸光(guang)率為(wei)縱(zong)坐標(biao)，以(yi)地(di)塞(sai)米松濃(nong)度(du)（ng /ml）的半(ban)對數為(wei)橫坐(zuo)標(biao)，繪(hui)制標(biao)準曲(qu)線(xian)圖。將樣本(ben)的(de)百(bai)分吸光(guang)率代(dai)入(ru)標(biao)準曲(qu)線(xian)中(zhong)，從標(biao)準曲(qu)線(xian)上(shang)讀出(chu)樣本(ben)所(suo)對應(ying)的濃(nong)度(du)，乘以(yi)其(qi)對應(ying)的稀(xi)釋(shi)倍(bei)數即為(wei)樣本(ben)中(zhong)地(di)塞(sai)米松實際(ji)含(han)量(liang)。

若(ruo)利用試(shi)劑(ji)盒(he)專(zhuan)業(ye)分析軟(ruan)件進(jin)行計算(suan)，更便(bian)於(yu)大量(liang)樣本(ben)的(de)準確(que)、快(kuai)速分析。（歡(huan)迎來(lai)電索取(qu)）  

3、標(biao)準曲(qu)線(xian)

B/B0 (%)

地(di)塞(sai)米松(ppb) [µg/kg]

圖1：地(di)塞(sai)米松檢測試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)回(hui)歸(gui)曲線(xian)

4、再(zai)現(xian)性

%CV

地(di)塞(sai)米松(ppb) [µg/kg]

圖2：地(di)塞(sai)米松檢測試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)精(jing)密度(du)

 由多(duo)個(ge)不同的實驗(yan)結(jie)果(guo)確定了精密(mi)度(du)，圖2顯示出地(di)塞(sai)米松檢測試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)精(jing)密度(du)情(qing)況，獲得(de)的(de)標(biao)準吸收值(zhi)的變(bian)異(yi)系數（%CV）對相應(ying)地(di)塞(sai)米松濃(nong)度(du)作(zuo)曲(qu)線(xian)，可以(yi)看(kan)到全(quan)部範(fan)圍(wei)內變(bian)異(yi)系數如此(ci)之低(di)，可以(yi)得(de)到(dao)很好的再(zai)現(xian)性。

【註意(yi)事項】  

1、 使用(yong)前將(jiang)所有試(shi)劑(ji)溫(wen)度(du)回(hui)升(sheng)至室(shi)溫(wen)20-25℃。試(shi)劑(ji)及(ji)標(biao)本(ben)沒(mei)有(you)回(hui)到室(shi)溫(wen)（20-25℃）會(hui)導致(zhi)所有(you)標(biao)準的(de)OD值(zhi)偏低。

2、 在(zai)洗(xi)板(ban)過程中(zhong)如果(guo)出現板(ban)孔(kong)幹燥(zao)的情(qing)況，則會伴(ban)隨(sui)著(zhe)出(chu)現(xian)標(biao)準曲(qu)線(xian)不成(cheng)線(xian)性，重(zhong)復(fu)性不好的(de)現(xian)象(xiang)。所以(yi)洗(xi)板(ban)拍(pai)幹後應(ying)立(li)即進(jin)行下(xia)壹(yi)步操作(zuo)。

3、 混(hun)合(he)要(yao)均(jun)勻(yun)，否則會出現(xian)重復(fu)性不好的(de)現(xian)象(xiang)。

4、 反應(ying)終止(zhi)液為2M硫(liu)酸，避(bi)免接(jie)觸(chu)皮(pi)膚(fu)。

5、 不要使(shi)用(yong)過了有效(xiao)日期(qi)的試(shi)劑(ji)盒(he)，稀(xi)釋(shi)或(huo)攙雜(za)使(shi)用會引(yin)起靈(ling)敏度(du)、OD值(zhi)的變(bian)化。不要交(jiao)換(huan)使(shi)用不同批(pi)號的(de)盒(he)中(zhong)試(shi)劑(ji)。

6、 不用的(de)微孔板(ban)放(fang)進自封袋密封；標(biao)準物(wu)質(zhi)和無(wu)色的發色劑對光(guang)敏感(gan)，因此(ci)要避(bi)免直(zhi)接(jie)暴露(lu)在(zai)光(guang)線(xian)下。

7、 顯色液若(ruo)有任何顏色表(biao)明(ming)變(bian)質(zhi)，應(ying)當棄(qi)之(zhi)。0標(biao)準的(de)吸光(guang)度(du)值(zhi)小於(yu)0.5個(ge)單(dan)位(wei)（A_450nm< 0.5 ）時，表(biao)示試(shi)劑(ji)可(ke)能(neng)變(bian)質(zhi)。

8、 該(gai)試(shi)劑(ji)盒(he)最(zui)佳反應(ying)溫(wen)度(du)為25℃，溫(wen)度(du)過高(gao)或(huo)過低(di)將導致(zhi)檢測吸光(guang)度(du)值(zhi)和靈敏度(du)發生(sheng)變(bian)化。

【儲(chu)存(cun)】

原包裝(zhuang)應(ying)儲(chu)存(cun)於(yu)2～8℃保鮮冷藏(zang)，切(qie)勿(wu)冷凍(dong)。

【有效(xiao)期(qi)】

有效(xiao)期(qi)12個(ge)月(yue);生(sheng)產(chan)日期(qi)、有效(xiao)期(qi)、生(sheng)產(chan)批(pi)號見(jian)外包裝(zhuang)。