磺胺(an)嘧啶檢測試(shi)劑盒說(shuo)明書

磺胺(an)嘧啶檢測試(shi)劑盒（養殖(zhi)水(shui)樣）使(shi)用(yong)說(shuo)明書

【原(yuan)理(li)】

本(ben)試劑(ji)盒采(cai)用(yong)間(jian)接(jie)競(jing)爭ELISA方法，在(zai)微孔(kong)條(tiao)上(shang)預(yu)包(bao)被偶聯(lian)抗原(yuan)，樣(yang)本(ben)中的(de)殘(can)留(liu)物磺胺(an)嘧啶與(yu)微孔(kong)條(tiao)上(shang)預(yu)包(bao)被的偶(ou)聯抗原(yuan)競(jing)爭抗磺胺(an)的抗體，加(jia)入酶(mei)標記(ji)物後，用(yong)TMB底物顯色，樣本(ben)吸光(guang)值與(yu)其(qi)所含磺胺(an)嘧啶的(de)含量成負相(xiang)關(guan)，與(yu)標準曲線(xian)比較即(ji)可得出(chu)殘(can)留(liu)物磺胺(an)嘧啶的(de)含量。

【試(shi)劑(ji)盒(he)技(ji)術(shu)指標】   

規(gui)      格：96孔/盒

靈 敏 度：0.2ppb

檢測時(shi)間(jian)： 45min

樣本(ben)定量檢測下(xia)限(xian)：  

水(shui)產養殖(zhi)尾水(shui)………………………………………3ppb

樣(yang)本(ben)回收(shou)率

水(shui)產養殖(zhi)尾水(shui)…………………………………80±15%

反(fan)應率(lv) ：

磺胺(an)嘧啶 …………………………………… 100%

【試劑(ji)盒組成】   

1． 微量測試(shi)孔：每條(tiao)8孔，壹(yi)板(ban)12條(tiao)

2． 標(biao) 準 液×6瓶(ping)：（1ml/瓶(ping)） 0ppb、0.2ppb、0.6pb、 1.8ppb、5.4ppb、16.2ppb

3． 高濃(nong)度標準品：×1瓶(ping)：（1ml/瓶(ping)） 100ppb

4． 酶(mei)標記(ji)物     7ml ………………………  紅(hong)色帽

5． 抗體工(gong)作液 7ml ………………………  綠(lv)色帽

6． 底物A液    7ml ………………………  棕(zong)色帽

7． 底物B液　7 ml ………………………  黑色帽

8． 終(zhong)止(zhi)液        7 ml …..…………………… 黃色帽

9． 20X濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液40 ml …………………白(bai)色帽

10． 2X濃(nong)縮(suo)復溶液 50 ml …………………  藍色帽

【所用(yong)儀器、試劑(ji)】   

具備的(de)儀器：微(wei)孔酶(mei)標儀、打印(yin)機、均(jun)質(zhi)器 、氮(dan)氣(qi)吹(chui)幹(gan)裝(zhuang)置、振(zhen)蕩器、離心(xin)機、刻(ke)度移液管、天(tian)平(ping)（感(gan)量0.01g）

微(wei)量移液器：單道(dao)20µl-200µl、100µl-1000µl，多(duo)道(dao)250µl

試(shi)         劑：去(qu)離子(zi)水(shui)（或蒸(zheng)餾水(shui)）

【實(shi)驗(yan)前(qian)溶液配(pei)制】

配(pei)液1、1×樣(yang)本(ben)復溶液：用(yong)去(qu)離子(zi)水(shui)將2X濃(nong)縮(suo)復溶液按1：1稀(xi)釋

（1份(fen)濃(nong)縮(suo)復溶液+1份(fen)去(qu)離子(zi)水(shui)）用(yong)於樣本(ben)復溶。

配(pei)液2：將40ml濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液（20倍濃(nong)縮(suo)）用(yong)去(qu)離子(zi)水(shui)按照(zhao)1：19

               稀(xi)釋(shi)（1份(fen)濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液+19份(fen)去(qu)離子(zi)水(shui)），或按所需用(yong)量

               配(pei)制(zhi)洗(xi)滌(di)液。

【樣本(ben)前處(chu)理步(bu)驟】   

樣(yang)本(ben)前處(chu)理須知    處理(li)任(ren)何樣(yang)本(ben)時(shi)，都必須註意(yi)：

（1）本(ben)試劑(ji)盒所檢測的(de)水(shui)樣樣本(ben)包括：養殖(zhi)用(yong)水(shui)和(he)水(shui)產尾水(shui)。

（2）實(shi)驗(yan)中(zhong)必(bi)須使(shi)用(yong)壹次性吸頭，在(zai)吸取不同(tong)試(shi)劑(ji)時(shi)要(yao)更(geng)換(huan)吸頭。

（3）實(shi)驗(yan)之(zhi)前(qian)須檢查各種(zhong)實(shi)驗(yan)器具是(shi)否(fou)幹(gan)凈，必要(yao)時(shi)可對(dui)實(shi)驗(yan)器具進行清(qing)潔，以(yi)避免汙(wu)染幹(gan)擾實(shi)驗(yan)結果。

樣本(ben)前處(chu)理步(bu)驟

（a）水(shui)產養殖(zhi)尾水(shui)

1、取50µl待檢水(shui)產養殖(zhi)尾水(shui)與(yu)200µl配(pei)制好(hao)的(de)1×樣(yang)本(ben)復溶液按(an)稀釋，混(hun)合(he)30s；

2、取(qu)50µl液體用(yong)於分析(xi)。

樣本(ben)稀釋(shi)倍數：5倍      

【酶(mei)標免疫(yi)分析(xi)程(cheng)序】   

操作步(bu)驟：

1、 將所需試(shi)劑(ji)從(cong)冷(leng)藏(zang)環境中取(qu)出(chu)，置(zhi)室溫(wen)（20-25℃）平衡30min以(yi)上，註意(yi)每種(zhong)液體(ti)試劑使(shi)用(yong)前均須搖勻。

2、 按(an)板架(jia)及(ji)需要(yao)取出(chu)微孔條(tiao)，將不用(yong)的微孔(kong)放入自(zi)封(feng)袋，保存於2-8℃。

3、 編(bian)號：將樣本(ben)和(he)標準品對(dui)應微(wei)孔按(an)序編號每個(ge)樣(yang)本(ben)和(he)標準品做(zuo)2孔(kong)平行，並記(ji)錄標準孔和(he)樣本(ben)孔所在(zai)的位(wei)置(zhi)。

4、 加(jia)標準品/樣本(ben)50µl /孔(kong)，然(ran)後(hou)加(jia)酶(mei)標記(ji)物50μl/孔，再(zai)加(jia)入抗體工(gong)作液50µl/孔。輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun)，用(yong)蓋(gai)板(ban)膜蓋(gai)板(ban)，25℃環境反(fan)應30min。

5、 取(qu)出用(yong)洗(xi)滌(di)液按每孔(kong)250μl洗(xi)板(ban)4-5次(ci)，每次(ci)浸(jin)泡15-30秒(miao)，拍(pai)幹(gan)（拍(pai)幹(gan)後未被清(qing)除(chu)的氣(qi)泡可用(yong)幹(gan)凈的槍頭刺破(po)）

6、 顯色：每孔(kong)加(jia)入底物液A液50µl再(zai)加(jia)B液50µl，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun)，25℃環境避光(guang)顯色15min。

7、 測定：每孔(kong)加(jia)入終止(zhi)液50µl，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun)，設(she)定酶(mei)標儀於(yu)450nm處（建議用(yong)雙波長450/630nm檢測在(zai)5min內(nei)讀完(wan)數據(ju)），測定吸光(guang)度值（OD值）。

【結果判(pan)定】   

結果判(pan)定有兩(liang)種方法，粗略判(pan)定可用(yong)第1種方法，定量判定用(yong)第2種方法。註意(yi)樣(yang)本(ben)吸光(guang)值與(yu)磺胺(an)嘧啶的(de)含量成負相(xiang)關(guan)。

1、 粗略(lve)判定

用(yong)樣本(ben)的平(ping)均吸光(guang)度值與(yu)標準值比(bi)較(jiao)即(ji)可得出(chu)其(qi)濃(nong)度範圍(wei)(ng /ml)。假(jia)設樣(yang)本(ben)1的吸光(guang)度值為(wei)0.221，樣本(ben)2的吸光(guang)度值為(wei)0.795，標準液吸光(guang)度值分別(bie)是(shi)：0ppb為(wei)1.81；0.2ppb為1.50；0.6ppb為(wei)1.114；1.8ppb為(wei)0.660； 5.4ppb為(wei)0.318；16.2ppb為(wei)0.145。則樣本(ben)1的濃(nong)度範圍(wei)是(shi)5.4ppb-16.2ppb；樣本(ben)2的濃(nong)度範圍(wei)是(shi)0.6ppb-1.8ppb。乘以(yi)其(qi)對(dui)應的(de)稀釋(shi)倍數即(ji)為(wei)樣(yang)本(ben)中磺胺(an)嘧啶實(shi)際(ji)含量。

2、 定量分析(xi)

（1）百(bai)分吸光(guang)率(lv)的(de)計(ji)算(suan)，標(biao)準品或樣本(ben)的百(bai)分吸光(guang)率(lv)等於(yu)標準品或樣本(ben)的百(bai)分吸光(guang)度值的(de)平(ping)均值（雙孔）除(chu)以(yi)第壹(yi)個(ge)標準（0標(biao)準）的吸光(guang)度值，再(zai)乘以(yi)100%，即(ji)：

B—標(biao)準溶液或樣本(ben)溶液的平(ping)均(jun)吸光(guang)度值

B₀—0ng/ml標(biao)準溶液的平(ping)均(jun)吸光(guang)度值

（2）標準曲線(xian)的繪(hui)制與(yu)計(ji)算(suan)

以(yi)標準品百(bai)分吸光(guang)率(lv)為(wei)縱(zong)坐(zuo)標，以(yi)磺胺(an)嘧啶濃(nong)度（ng /ml）的半(ban)對(dui)數為(wei)橫(heng)坐(zuo)標，繪(hui)制標(biao)準曲線(xian)圖(tu)。將樣本(ben)的百(bai)分吸光(guang)率(lv)代入標準曲線(xian)中，從標準曲線(xian)上讀出樣(yang)本(ben)所對(dui)應的(de)濃(nong)度，乘以(yi)其(qi)對(dui)應的(de)稀釋(shi)倍數即(ji)為(wei)樣(yang)本(ben)中磺胺(an)嘧啶實(shi)際(ji)含量。

若利用(yong)試劑盒(he)專(zhuan)業分析(xi)軟(ruan)件進行計(ji)算(suan)，更(geng)便於大量樣本(ben)的準確、快(kuai)速分析(xi)。（歡(huan)迎來電索(suo)取）

3、標準曲線(xian)：

B/B0 (%)

         0.2                0.6                1.8                   5.4               16.2

 (ppb) [µg/kg]

圖(tu)1：磺胺(an)嘧啶檢測試(shi)劑盒的(de)回歸(gui)曲(qu)線(xian)

4、再(zai)現(xian)性：

%CV 

      0      0.2            0.6             1.8          5.4         16.2

(ppb) [µg/kg]

圖(tu)2：磺胺(an)嘧啶檢測試(shi)劑盒的精(jing)密(mi)度

由(you)多個不同(tong)的(de)實(shi)驗(yan)結果確定了(le)精(jing)密(mi)度，圖(tu)2顯示(shi)出(chu)磺胺(an)嘧啶檢測試(shi)劑盒的(de)精(jing)密(mi)度情(qing)況(kuang)，獲得(de)的(de)標(biao)準吸收值的(de)變(bian)異系(xi)數（%CV）對(dui)相應磺胺(an)嘧啶濃(nong)度作曲(qu)線(xian)，可以(yi)看到(dao)在(zai)全(quan)部範(fan)圍(wei)內(nei)變(bian)異系(xi)數如(ru)此之低，可以(yi)得到(dao)很好的(de)再(zai)現(xian)性。

【註意(yi)事(shi)項】   

1、 使(shi)用(yong)前將所有試(shi)劑溫(wen)度回升(sheng)至(zhi)室(shi)溫(wen)20-25℃。試劑及標(biao)本(ben)沒(mei)有回(hui)到室溫(wen)（20-25℃）會導(dao)致(zhi)所有標(biao)準的OD值偏低。

2、 在(zai)洗(xi)板(ban)過(guo)程(cheng)中如(ru)果(guo)出現(xian)板(ban)孔(kong)幹(gan)燥的情(qing)況(kuang)，則會伴隨著(zhe)出(chu)現(xian)標(biao)準曲線(xian)不成線(xian)性，重(zhong)復(fu)性不好(hao)的(de)現(xian)象(xiang)。所以(yi)洗(xi)板(ban)拍(pai)幹(gan)後應立(li)即(ji)進行下(xia)壹(yi)步操作。

3、 混(hun)合(he)要(yao)均勻(yun)，否則會出(chu)現(xian)重(zhong)復(fu)性不好(hao)的(de)現(xian)象(xiang)。

4、 反(fan)應終(zhong)止(zhi)液為2M硫酸，避免接(jie)觸皮(pi)膚(fu)。

5、 不要(yao)使(shi)用(yong)過了有效日(ri)期的試劑(ji)盒(he)，稀釋(shi)或攙(chan)雜使(shi)用(yong)會引(yin)起(qi)靈敏(min)度、OD值的(de)變(bian)化(hua)。不要(yao)交(jiao)換(huan)使(shi)用(yong)不同(tong)批(pi)號的盒中試(shi)劑(ji)。

6、 不用(yong)的微孔(kong)板放進自(zi)封(feng)袋密(mi)封(feng)；標準物質(zhi)和(he)無色的發色劑對(dui)光(guang)敏(min)感(gan)，因(yin)此要(yao)避免直(zhi)接(jie)暴露在(zai)光(guang)線(xian)下(xia)。

7、 顯色液若有任(ren)何顏(yan)色表明變(bian)質(zhi)，應當(dang)棄之(zhi)。0標準的吸光(guang)度值小於(yu)0.5個(ge)單位（A_450nm< 0.5 ）時(shi)，表示(shi)試(shi)劑可能變(bian)質(zhi)。

8、 該試(shi)劑(ji)盒最(zui)佳反(fan)應溫(wen)度為25℃，溫(wen)度過高或過低將導致(zhi)檢測吸光(guang)度值和(he)靈敏度發生(sheng)變(bian)化(hua)。

【儲存】

原(yuan)包(bao)裝(zhuang)應儲存於(yu)2～8℃保鮮(xian)冷藏(zang)，切(qie)勿(wu)冷凍。

【有效期】

有效期12個(ge)月(yue);生(sheng)產日(ri)期、有效期、生(sheng)產批(pi)號見(jian)外包(bao)裝(zhuang)。