人抗腎(shen)小(xiao)球(qiu)基(ji)底膜(mo)抗體(ti)(GBM）ELISA試劑盒簡(jian)介

人(ren)抗腎(shen)小(xiao)球(qiu)基(ji)底膜(mo)抗體(ti)(GBM）ELISA試劑盒簡(jian)介

備(bei)註：

1、標準品濃(nong)度依(yi)次(ci)為：詳(xiang)見說(shuo)明(ming)書(shu)；

2、經過大量(liang)正常(chang)標本檢驗，標本的正常(chang)濃(nong)度值(zhi)均在(zai)試劑盒提(ti)供的檢測範圍(wei)內(nei)，實(shi)驗過程中直(zhi)接(jie)取(qu)50μL樣(yang)本(ben)上樣(yang)即(ji)可。當(dang)有(you)部(bu)分樣(yang)本(ben)值(zhi)超(chao)過(guo)最大標準品濃(nong)度時，可用(yong)樣(yang)本(ben)稀(xi)釋(shi)液將(jiang)標本進(jin)行(xing)適當(dang)稀釋(shi)後再進行(xing)實(shi)驗。

註意事(shi)項(xiang)

1、嚴(yan)格(ge)按照(zhao)規定(ding)的時間和(he)溫度進(jin)行(xing)溫育以(yi)保證(zheng)準確結果(guo)。所(suo)有(you)試劑都(dou)必(bi)須(xu)在使(shi)用(yong)前(qian)達到(dao)室溫20-25℃。使(shi)用(yong)後立即(ji)冷(leng)藏(zang)保存(cun)試劑。

2、洗(xi)板不正確可以(yi)導(dao)致(zhi)不準確的結果(guo)。在(zai)加入(ru)底(di)物(wu)前(qian)確保盡(jin)量(liang)吸幹孔內(nei)液(ye)體。溫育過(guo)程中不要讓(rang)微孔(kong)幹燥掉(diao)。

3、消(xiao)除(chu)板底(di)殘留的液(ye)體(ti)和手指(zhi)印，否則影響OD值(zhi)。

4、底(di)物(wu)顯色液(ye)應呈(cheng)無色(se)或(huo)很(hen)淺(qian)的顏(yan)色(se)，已經變(bian)藍的底(di)物(wu)液不能(neng)使(shi)用(yong)。

5、避(bi)免(mian)試劑和(he)標本的交(jiao)叉(cha)汙染以(yi)免(mian)造成錯(cuo)誤結果(guo)。

6、在(zai)儲存(cun)和溫育時避免(mian)強(qiang)光直(zhi)接(jie)照射(she)。

7、平(ping)衡至室溫後再打(da)開密封(feng)袋(dai)以(yi)防(fang)水滴凝聚(ju)在(zai)冷(leng)板條上。

8、任(ren)何反(fan)應(ying)試劑不能(neng)接(jie)觸(chu)漂白(bai)溶劑或(huo)漂白(bai)溶劑所散(san)發(fa)的強(qiang)烈氣體(ti)。任(ren)何漂白(bai)成分都會破(po)壞(huai)試劑盒中反(fan)應(ying)試劑的生(sheng)物(wu)活性(xing)。

9、不能(neng)使(shi)用(yong)過期(qi)產品(pin)。

10、如果(guo)可能(neng)傳(chuan)播(bo)疾病，所(suo)有(you)的樣(yang)品(pin)都(dou)應(ying)管理(li)好，按照(zhao)規定(ding)的程序處(chu)理(li)樣(yang)品(pin)和(he)檢測裝置。

試劑準備

試劑盒從(cong)冷(leng)藏(zang)環(huan)境(jing)中取(qu)出(chu)應在(zai)室溫平衡後方可使(shi)用(yong)。

20×洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液的稀(xi)釋(shi)：蒸餾(liu)水按1：20稀(xi)釋(shi)，即(ji)1份(fen)20×洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液加19份(fen)蒸餾(liu)水。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)

1.從(cong)室溫平衡20min後的鋁(lv)箔袋(dai)中取(qu)出(chu)所需(xu)板條，剩余(yu)板條用(yong)自封(feng)袋密(mi)封(feng)放(fang)回(hui)4℃。

2. 設(she)置標準品孔(kong)和(he)樣(yang)本(ben)孔(kong)，標準品孔(kong)各(ge)加不同濃(nong)度的標準品50μL；

3.樣(yang)本(ben)孔(kong)中加入(ru)待(dai)測樣(yang)本(ben)50μL；空(kong)白(bai)孔不加。

4. 除(chu)空白(bai)孔外，標準品孔(kong)和(he)樣(yang)本(ben)孔(kong)中每(mei)孔(kong)加入(ru)辣(la)根(gen)過氧化(hua)物(wu)酶（HRP）標記的檢測抗體(ti)100μL，用(yong)封板膜(mo)封(feng)住(zhu)反(fan)應(ying)孔(kong)，37℃水浴(yu)鍋或(huo)恒溫箱溫育60min。

5. 棄(qi)去液(ye)體(ti)，吸(xi)水紙(zhi)上拍幹，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液（350μL），靜置1min，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液，吸水紙(zhi)上拍幹，如此(ci)重復(fu)洗(xi)板5次(ci)（也可用(yong)洗(xi)板機(ji)洗(xi)板）。

6.每(mei)孔(kong)加入(ru)底(di)物(wu)A、B各(ge)50μL，37℃避(bi)光孵育15min。

7.每(mei)孔(kong)加入(ru)終止(zhi)液50μL，15min內(nei)，在(zai)450nm波長處(chu)測定(ding)各(ge)孔的OD值(zhi)。

實(shi)驗結果(guo)計(ji)算

以(yi)所(suo)測標準品的OD值(zhi)為橫坐(zuo)標，標準品的濃(nong)度值(zhi)為縱坐(zuo)標，在坐(zuo)標紙(zhi)上或(huo)用(yong)相關軟件繪(hui)制標準曲線(xian)，並(bing)得(de)到(dao)直(zhi)線(xian)回(hui)歸方程，將(jiang)樣(yang)品(pin)的OD值(zhi)代(dai)入(ru)方程，計(ji)算出(chu)樣(yang)品(pin)的濃(nong)度。

試劑盒性(xing)能(neng)

1、檢測範圍(wei)：詳(xiang)見產品(pin)說明(ming)書(shu)。

2、靈敏度：最(zui)di檢測濃(nong)度小(xiao)於(yu)0.1 U/L。

3、特異(yi)性：不與(yu)其它(ta)可溶(rong)性(xing)結構(gou)類(lei)似物(wu)交(jiao)叉(cha)反應(ying)。

4、重(zhong)復(fu)性(xing)：板內(nei)變(bian)異系(xi)數小(xiao)於10% ，板間(jian)變(bian)異系(xi)數小(xiao)於15% 。