強(qiang)力黴(mei)素ELISA檢測(ce)試劑(ji)盒(he)簡介(jie)

強(qiang)力黴(mei)素檢測(ce)試劑(ji)盒(he)

使(shi)用說(shuo)明書

（酶(mei)聯免疫(yi)法(fa)）

本(ben)試劑(ji)盒(he)采用(yong)間接(jie)競爭(zheng)ELISA方法(fa)檢測(ce)組(zu)織、蜂蜜、雞(ji)蛋等樣(yang)本中(zhong)的(de)強(qiang)力黴(mei)素藥物(wu)（Doxycycline，DOX），試劑(ji)盒(he)由預(yu)包被偶聯抗(kang)原(yuan)的(de)酶(mei)標板(ban)、辣根(gen)酶(mei)標記(ji)物(wu)、抗(kang)體(ti)、標準(zhun)品及(ji)其(qi)他(ta)配(pei)套試劑(ji)組(zu)成。檢測(ce)時，加(jia)入(ru)標準(zhun)品或(huo)樣品溶(rong)液，樣(yang)本(ben)中(zhong)的(de)強(qiang)力黴(mei)素藥物(wu)和(he)酶(mei)標板(ban)上(shang)預(yu)包被偶聯抗(kang)原(yuan)競爭(zheng)抗(kang)強(qiang)力黴(mei)素藥物(wu)抗(kang)體(ti)，加(jia)入(ru)酶(mei)標記(ji)物(wu)後，用TMB底物(wu)顯(xian)色，樣(yang)本(ben)吸光度值與(yu)其所(suo)含(han)強力黴(mei)素藥物(wu)含(han)量(liang)成負(fu)相(xiang)關(guan)，與(yu)標準(zhun)曲線比(bi)較即(ji)可得(de)出(chu)樣(yang)本(ben)中(zhong)強力黴(mei)素藥物(wu)的(de)殘(can)留量(liang)。

組(zu)織、肝臟(zang)、雞(ji)蛋…………………2ppb

蜂(feng)蜜…………………………………2ppb

尿樣(yang)………………………………0.5ppb

牛(niu)奶(nai)…………………………………2ppb

奶(nai)粉…………………………………4ppb

強(qiang)力黴(mei)素……………………………100%

四(si)環素………………………………143%

金(jin)黴(mei)素………………………………15%

土黴(mei)素………………………………15%

組(zu)織…………………………85±20%

肝(gan)臟(zang)、雞(ji)蛋…………………75±20%

蜂(feng)蜜…………………………85±20%

尿樣(yang)…………………………80±20%

牛(niu)奶(nai)、奶(nai)粉…………………75±20%

酶(mei)標板(ban)………………………96孔(kong)

高(gao)濃度(du)標準(zhun)品溶(rong)液1瓶(ping)：（1ml/瓶(ping)）1.0ppm（高(gao)標準(zhun)液有(you)揮(hui)發(fa)性(xing)，需註(zhu)意密(mi)封(feng)）

標準(zhun)品溶(rong)液0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb（均(jun)為空(kong)瓶(ping)子(zi)，現(xian)配(pei)現(xian)用）。

酶(mei)標記(ji)物(wu)（紅(hong)蓋(gai)）……………………11ml

抗(kang)體(ti)工(gong)作(zuo)液（藍(lan)蓋(gai)）…………………5.5ml

底物(wu)液A（白(bai)蓋(gai)）……………………6ml

底物(wu)液B（黑(hei)蓋）……………………6ml

終(zhong)止(zhi)液（黃(huang)蓋(gai)）………………………6ml

20×濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌液（白(bai)蓋(gai)）……………40ml

5×復(fu)溶(rong)液（黃(huang)蓋(gai)） …………………50ml

說(shuo)明書…………………………………1份(fen)

蓋(gai)板膜…………………………………1張

自封(feng)袋…………………………………1個

5.1 樣(yang)本處(chu)理(li)前(qian)須知：

實(shi)驗(yan)器(qi)具必(bi)須潔凈並使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)吸頭，以避免(mian)汙(wu)染(ran)幹擾實驗(yan)結果。

5.2 配(pei)液：

將5×復(fu)溶(rong)液用(yong)去離子(zi)水5倍(bei)稀(xi)釋（1份(fen)5×復(fu)溶(rong)液加(jia)4份(fen)去離子(zi)水），用(yong)於樣(yang)本(ben)的(de)復(fu)溶(rong)，復(fu)溶(rong)液在(zai)4℃環境可保存壹(yi)個月。

將濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌液20倍(bei)稀(xi)釋(1份(fen)洗滌液(ye)加(jia)19份(fen)去離子(zi)水)。

取(qu)4.3mL濃(nong)鹽酸加(jia)去離子(zi)水混(hun)勻，定(ding)容至(zhi)50mL，再加(jia)入(ru)450ml無水(shui)甲醇。

5.3.1 組(zu)織、肝臟(zang)、雞(ji)蛋樣本(ben)處理(li)方法(fa)

1）準(zhun)確(que)稱(cheng)取(qu)1±0.05g均質後(hou)的(de)樣(yang)本於離心管中(zhong)，加(jia)入(ru)2ml 樣(yang)本提取(qu)液（配(pei)液3），劇烈振(zhen)蕩(dang)2min，使(shi)樣本(ben)徹di分(fen)散(san)，充分(fen)與(yu)有機(ji)相(xiang)接(jie)觸(chu)，室溫(wen)4000轉(zhuan)/分(fen)以(yi)上(shang)，離心5min；

2）取(qu)出50ul上(shang)層(ceng)液(ye)體(ti)（樣(yang)本脂(zhi)肪(fang)多最上(shang)層(ceng)會有(you)白(bai)色(se)漂浮物，不要取(qu)到）,加(jia)入(ru)950ul復(fu)溶(rong)液混(hun)勻；

3）取(qu)50 µl用(yong)於分(fen)析(xi)。

    樣(yang)本稀(xi)釋倍(bei)數(shu)：40    檢測(ce)下(xia)限：2ppb

5.3.2 蜂(feng)蜜樣(yang)本(ben)處理(li)方法(fa)

1）準(zhun)確(que)稱(cheng)取(qu)1±0.05g蜂蜜樣(yang)本(ben)於離心管中(zhong)，加(jia)入(ru)1ml樣(yang)本提取(qu)液（配(pei)液3），振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻2min，使(shi)蜂蜜充分(fen)溶(rong)解(jie)；

2）取(qu)出50ul混(hun)合(he)液,加(jia)入(ru)950ul復(fu)溶(rong)液混(hun)勻；

3）取(qu)50µl用(yong)於分(fen)析(xi)。

    樣(yang)本稀(xi)釋倍(bei)數(shu)：40    檢測(ce)下(xia)限：2ppb

5.3.3 尿樣(yang)本的(de)處(chu)理(li)方法(fa)

1）用(yong)復(fu)溶(rong)液將尿樣(yang)10倍(bei)稀(xi)釋（如果尿樣(yang)渾(hun)濁(zhuo)壹(yi)定(ding)要過(guo)濾或(huo)離心10min，4000r/min，直至(zhi)得(de)到(dao)清(qing)亮(liang)尿樣(yang)），暫不使用(yong)的(de)樣(yang)本應冷(leng)凍保存。

2）取(qu)50µl稀釋的(de)尿樣(yang)用於分(fen)析(xi)。

    樣(yang)本稀(xi)釋倍(bei)數(shu)：10    檢測(ce)下(xia)限：0.5ppb

5.3.4 牛(niu)奶(nai)樣本(ben)處理(li)方法(fa)

1）準(zhun)確(que)吸取(qu)1ml牛(niu)奶(nai)於離心管中(zhong)， 加(jia)2ml樣(yang)本提取(qu)液（配(pei)液3），振(zhen)蕩(dang)2min，室(shi)溫(wen)4000轉(zhuan)/分(fen)以(yi)上(shang)，離心5min；

2）取(qu)50ul上(shang)層(ceng)液(ye)，加(jia)入(ru)950ul復(fu)溶(rong)液，混(hun)勻；

3）取(qu)50µl用(yong)於分(fen)析(xi)。

樣(yang)本稀(xi)釋倍(bei)數(shu)：40    檢測(ce)下(xia)限：2ppb  

5.3.5 奶(nai)粉樣(yang)本(ben)處理(li)方法(fa)

1）準(zhun)確(que)稱(cheng)取(qu)1±0.05g奶(nai)粉於離心管中(zhong)，加(jia)入(ru)4ml樣(yang)本提取(qu)液（配(pei)液3），振(zhen)蕩(dang)2min，室(shi)溫(wen)4000轉(zhuan)/分(fen)以(yi)上(shang)，離心5min；

2）取(qu)50ul上(shang)層(ceng)液(ye)，加(jia)入(ru)950ul復(fu)溶(rong)液，混(hun)勻；

3）取(qu)50µl用(yong)於分(fen)析(xi)。

    樣(yang)本稀(xi)釋倍(bei)數(shu)：80    檢測(ce)下(xia)限：4ppb

實(shi)驗(yan)開始前(qian)需配(pei)制標準(zhun)品應(ying)用液；低(di)濃度(du)的(de)標準(zhun)品不穩定(ding)，需現(xian)配(pei)現(xian)用。

在(zai)0ppb的(de)瓶(ping)中(zhong)加(jia)復(fu)溶(rong)液3ml，0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb的(de)瓶(ping)中(zhong)分(fen)別加(jia)復(fu)溶(rong)液2ml，4.05ppb的(de)瓶(ping)中(zhong)加(jia)復(fu)溶(rong)液3ml。

標準(zhun)液6：取(qu)1.0ppm高(gao)濃度(du)標準(zhun)品溶(rong)液12ul加(jia)入(ru)裝有3ml 復(fu)溶(rong)液4.05ppb的(de)瓶(ping)中(zhong)，蓋緊，混(hun)勻，濃(nong)度即(ji)為(wei)4.05ppb。

標準(zhun)液5：取(qu)1ml標準(zhun)液6加(jia)入(ru)裝有2ml 復(fu)溶(rong)液1.35ppb的(de)瓶(ping)中(zhong)，蓋緊，混(hun)勻，濃(nong)度即(ji)為(wei)1.35ppb。

標準(zhun)液4：取(qu)1ml標準(zhun)液5加(jia)入(ru)裝有2ml 復(fu)溶(rong)液0.45ppb的(de)瓶(ping)中(zhong)，蓋緊，混(hun)勻，濃(nong)度即(ji)為(wei)0.45ppb。

標準(zhun)液3：取(qu)1ml標準(zhun)液4加(jia)入(ru)裝有2ml 復(fu)溶(rong)液0.15ppb的(de)瓶(ping)中(zhong)，蓋緊，混(hun)勻，濃(nong)度即(ji)為(wei)0.15ppb。

標準(zhun)液2：取(qu)1ml標準(zhun)液3加(jia)入(ru)裝有2ml 復(fu)溶(rong)液0.05ppb的(de)瓶(ping)中(zhong)，蓋緊，混(hun)勻，濃(nong)度即(ji)為(wei)0.05ppb。

標準(zhun)液1：直(zhi)接(jie)使(shi)用復(fu)溶(rong)液，濃(nong)度即(ji)為(wei)0ppb。

A—標準(zhun)溶(rong)液或(huo)樣(yang)本(ben)溶(rong)液的(de)平(ping)均吸光度值

A0—0ppb標準(zhun)溶(rong)液的(de)平(ping)均吸光度值

7.2 標準(zhun)曲線的(de)繪(hui)制(zhi)與(yu)計算(suan)

    以(yi)標準(zhun)液百(bai)分(fen)吸光率為縱(zong)坐(zuo)標，對(dui)應的(de)標準(zhun)液濃(nong)度(du)（ppb）的(de)對(dui)數(shu)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標，繪(hui)制(zhi)標準(zhun)液的(de)半(ban)對(dui)數(shu)曲線圖(tu)。將樣本(ben)的(de)百(bai)分(fen)吸光率代(dai)入(ru)標準(zhun)曲線中(zhong)，從標準(zhun)曲線上(shang)讀(du)出樣本所(suo)對(dui)應的(de)濃(nong)度，乘(cheng)以(yi)其對(dui)應的(de)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)即(ji)為(wei)樣本中(zhong)待(dai)測(ce)物的(de)實(shi)際(ji)濃(nong)度(du)。

    若(ruo)利用(yong)試劑(ji)盒(he)專(zhuan)業分(fen)析(xi)軟件(jian)進行(xing)計算(suan)，更便(bian)於大(da)量(liang)樣本(ben)的(de)準(zhun)確(que)、快速(su)分(fen)析(xi)。（歡迎(ying)來電(dian)索(suo)取(qu)）

8 註(zhu)意事項(xiang)

8.1 室(shi)溫(wen)低於25℃或(huo)試劑(ji)及(ji)樣(yang)本(ben)沒(mei)有回(hui)到室(shi)溫(wen)（25℃）會導(dao)致(zhi)所(suo)有(you)標準(zhun)的(de)OD值(zhi)偏低。

8.2 在(zai)洗板(ban)過(guo)程(cheng)中(zhong)如果出(chu)現(xian)板孔(kong)幹燥(zao)的(de)情(qing)況(kuang)，則會出(chu)現(xian)標準(zhun)曲線不成線性(xing)，重復(fu)性(xing)不好的(de)現(xian)象。所(suo)以洗板拍幹後應(ying)立即(ji)進(jin)行下(xia)壹(yi)步(bu)操(cao)作(zuo)。

8.3 混(hun)合(he)要均(jun)勻，洗板(ban)要(yao)徹di，在(zai)ELISA分(fen)析(xi)中(zhong)的(de)再(zai)現(xian)性(xing)，很大(da)程(cheng)度上(shang)取(qu)決於洗(xi)板(ban)的(de)壹(yi)致(zhi)性(xing)。

8.4 在(zai)所有(you)孵育(yu)過(guo)程(cheng)中(zhong)，用蓋板膜封(feng)住(zhu)微(wei)孔(kong)板，避免(mian)光(guang)線(xian)照射(she)。

8.5 不要使(shi)用(yong)過(guo)了(le)有效(xiao)期的(de)試劑(ji)盒(he)，不要交(jiao)換(huan)使(shi)用(yong)不同(tong)批(pi)號(hao)試劑(ji)盒(he)中(zhong)的(de)試劑(ji)。

8.6 顯(xian)色液(ye)若(ruo)有(you)任何顏(yan)色表(biao)明變質，應(ying)當(dang)棄之。0標準(zhun)的(de)吸光度值小於0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑(ji)可能(neng)變質。

8.7 反(fan)應終(zhong)止(zhi)液有(you)腐(fu)蝕性(xing)，避免(mian)接(jie)觸(chu)皮膚。

9 貯(zhu)藏(zang)及(ji)保存期

儲(chu)藏條件：試劑(ji)盒(he)於2-8℃保存，避免(mian)冷(leng)凍。

保 質 期：該產(chan)品有(you)效(xiao)期為1年(nian)，生(sheng)產(chan)日(ri)期見包裝盒。