地(di)克(ke)珠(zhu)利(li)ELISA檢測試劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書

                    地克(ke)珠(zhu)利(li)快速檢測試(shi)劑(ji)盒(he)

使用說(shuo)明(ming)書

地克(ke)珠(zhu)利(li) ELISA試劑(ji)盒(he)則(ze)能(neng)夠(gou)快速(su)而準確(que)的(de)分析(xi)豬(zhu)肉、雞(ji)肉、飼料(liao)樣品(pin)中地(di)克(ke)珠(zhu)利(li)殘(can)留(liu)。

本(ben)試劑(ji)盒(he)采(cai)用(yong)間接競爭ELISA方法，在(zai)微(wei)孔條(tiao)上(shang)預(yu)包被偶聯(lian)抗(kang)原(yuan)，樣本(ben)中的(de)殘(can)留(liu)物地(di)克(ke)珠(zhu)利(li)和微(wei)孔條(tiao)上(shang)預(yu)包被的(de)偶聯(lian)抗(kang)原(yuan)競爭地(di)克(ke)珠(zhu)利(li)抗(kang)體(ti)，加(jia)入酶標(biao)記物後(hou)，用(yong)TMB底物顯(xian)色，樣本(ben)吸光(guang)值與其(qi)所含(han)殘(can)留(liu)物地(di)克(ke)珠(zhu)利(li)的含(han)量成(cheng)負(fu)相(xiang)關，與標準曲(qu)線(xian)比(bi)較可得(de)出相(xiang)應殘(can)留(liu)物地(di)克(ke)珠(zhu)利(li)的含(han)量。

規       格(ge)：96孔/盒(he)

靈 敏 度(du)：0.1ppb

檢測時間： 45min

樣本(ben)檢測(ce)下限：

組(zu)織(zhi)…………………………………………0.5ppb

牛(niu)奶……………………………………………2ppb

反應率：

地(di)克(ke)珠(zhu)利(li)……………………………………100%

回收率：

組(zu)織(zhi)/牛奶………………………………………85±10%

飼    料(liao)…………………………………………75±10%

【試(shi)劑(ji)盒(he)組(zu)成(cheng)】   

1、 微(wei)量測(ce)試孔：（1X96孔板）每條(tiao)8孔，壹(yi)板12條

2、 標(biao)準液(ye)X6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb

3、 高(gao)濃(nong)度(du)標準品(pin)×1瓶：（1ml/瓶(ping)）100ppb

4、 酶標(biao)記物         7ml…………………………紅(hong)色帽

5、 抗(kang)體(ti)工(gong)作(zuo)液(ye)     7ml…………………………綠色帽

6、 底物液 A液(ye)    7ml…………………………棕(zong)色帽

7、 底物液 B液(ye)    7ml…………………………黑色帽

8、 終 止 液          7ml…………………………黃色帽

9、 20X濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液40ml…………………… 白(bai)色帽

10、 2X濃(nong)縮(suo)復溶(rong)液(ye)50 ml      ………………… 藍色帽

【所用儀(yi)器、試(shi)劑(ji)】   

（1）設(she)備：

微(wei)孔板酶(mei)標(biao)儀(yi)(450nm)、振蕩(dang)器、離(li)心(xin)機、微(wei)量移(yi)液器：20μl～200μl,100μl~1000μl 、容(rong)量瓶(ping)：100ml，500ml，1000ml

（2）試劑(ji)：乙腈(jing)、正(zheng)己(ji)烷(wan)、氯化(hua)鈉

【實驗(yan)前溶液(ye)配制】

配液1：1X復溶液

               2X復(fu)溶(rong)液在(zai)使(shi)用(yong)前請按(an)1：1稀(xi)釋(shi)

            （1份(fen)濃(nong)縮(suo)復溶(rong)液(ye)+1份(fen)去離(li)子水）

配液2：洗滌(di)液

              將(jiang)40ml濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液（20倍(bei)濃(nong)縮(suo)）用蒸(zheng)餾(liu)水稀(xi)釋(shi)

             20×濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液在(zai)使(shi)用(yong)前請按(an)1：19稀(xi)釋(shi)（1份(fen)     

             濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液+19份(fen)去離(li)子水）（可按(an)需配置）

【樣本(ben)前處(chu)理步(bu)驟(zhou)】   

樣本(ben)前處(chu)理須(xu)知

處(chu)理任(ren)何樣本(ben)時，都(dou)必(bi)須(xu)註意：

（a）本(ben)試劑(ji)盒(he)所檢測(ce)的(de)組(zu)織(zhi)樣本(ben)包括：動物組(zu)織(zhi)、禽(qin)類(lei)和水產組(zu)織(zhi)。eg:雞(ji)、鴨(ya)、牛(niu)、兔(tu)、魚、蝦等(deng)。

（b）實驗(yan)中(zhong)必(bi)須(xu)使用(yong)壹次(ci)性吸頭，在(zai)吸(xi)取(qu)不(bu)同(tong)的(de)試劑(ji)時要(yao)更換吸頭。

（c）實驗(yan)之(zhi)前須(xu)檢查(zha)各種(zhong)實驗(yan)器具(ju)是否(fou)幹(gan)凈，必(bi)要(yao)時可(ke)對(dui)實(shi)驗(yan)器具(ju)進行(xing)清(qing)潔(jie)，以避(bi)免(mian)汙(wu)染幹(gan)擾實驗(yan)結果(guo)。

  樣本(ben)前處(chu)理方法

（A）動物組(zu)織(zhi)樣本(ben)、蛋類 、飼料(liao)

1、 用均(jun)質器均(jun)質樣本(ben)；稱取2±0.05g樣本(ben)於50ml離心(xin)管中(zhong)，加(jia)入0.5g氯(lv)化(hua)鈉，再加(jia)入5ml乙(yi)腈(jing)，用(yong)振蕩(dang)器振蕩(dang)5分鐘；4000轉(zhuan)/分以上(shang),室(shi)溫(wen)離(li)心(xin)10分鐘；

2、 取(qu)上(shang)清(qing)液(ye)2.5ml至幹(gan)凈玻(bo)璃(li)試管(guan)中，於65℃水浴(yu)下(xia)氮(dan)氣/空氣吹(chui)幹(gan)；

3、 加(jia)入1ml正(zheng)己(ji)烷(wan)溶解(jie)幹(gan)燥(zao)的殘(can)留(liu)物，再加(jia)1ml稀(xi)釋(shi)後(hou)的(de)復溶液強(qiang)烈(lie)振蕩(dang)混合(he)30s，室(shi)溫(wen)4000r/min以(yi)上離心(xin)5min。

（註：如(ru)出現乳(ru)化(hua)現象(xiang)；可置於80度(du)水浴(yu)十(shi)分鐘後(hou)再次離心(xin)）

4、 取50 µl下(xia)層(ceng)相(xiang)與取(qu)200 µl稀(xi)釋(shi)後(hou)的(de)復溶液強(qiang)烈(lie)振蕩(dang)混合(he)30s後(hou)，取50 µl用(yong)於分析(xi)。

樣本(ben)稀(xi)釋(shi)倍數：5  

（B）牛(niu)奶

1、取1ml牛奶樣本(ben)於離心(xin)管中(zhong)，在(zai)3000r/min，4℃離心(xin)10min，

      去除上層(ceng)脂(zhi)肪。

2、取(qu)50ul上清(qing)液(ye)，加(jia)入950ul 稀(xi)釋(shi)後(hou)的(de)復溶液混(hun)勻(yun)，混(hun)合(he)30s。

3、取50µl液體用於分析(xi)。

     樣本(ben)稀(xi)釋(shi)倍數：20倍(bei)

【酶(mei)標(biao)免(mian)疫分析(xi)程序(xu)】

操作步驟(zhou)：

1、 將(jiang)所需試劑(ji)從冷藏(zang)環(huan)境(jing)中取(qu)出，置(zhi)室溫(wen)（20-25℃）平(ping)衡30min以上(shang)，註意每種(zhong)液體試劑(ji)使用(yong)前均須(xu)搖(yao)勻。

2、 按(an)板架(jia)及(ji)需要取出微(wei)孔條(tiao)，將(jiang)不(bu)用(yong)的微(wei)孔放(fang)入(ru)自(zi)封(feng)袋，保存(cun)於2-8℃。

3、 編號：將樣本(ben)和標(biao)準品(pin)對(dui)應微(wei)孔按(an)序編號每個(ge)樣本(ben)和標(biao)準品(pin)做2孔平(ping)行(xing)，並(bing)記錄(lu)標準孔和樣本(ben)孔所在(zai)的(de)位置(zhi)。

4、 加(jia)標(biao)準品(pin)/樣本(ben)50µl/孔到(dao)各自(zi)的(de)微(wei)孔中(zhong)，然(ran)後(hou)加(jia)酶(mei)標(biao)記物50µl再加(jia)抗(kang)體(ti)50µl/孔，用(yong)蓋板膜(mo)封(feng)板，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混勻(yun)。25℃環(huan)境(jing)中反(fan)應30min。

5、 取(qu)出將(jiang)孔內(nei)液體(ti)甩(shuai)幹(gan)，用洗液(ye)250µl/孔洗板4-5次，每(mei)次間(jian)隔15-30秒(miao)，用吸水紙拍(pai)幹(gan)（拍(pai)幹(gan)後(hou)未(wei)被清(qing)除的氣泡(pao)可(ke)用(yong)幹(gan)凈的(de)槍(qiang)頭刺(ci)破(po)）。

6、 顯(xian)色：每(mei)孔加(jia)入A液(ye)50µl，再加(jia)B液(ye)50µl，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)混勻(yun)，25℃環(huan)境(jing)中避(bi)光(guang)顯(xian)色15min。

7、 測(ce)定：每(mei)孔加(jia)入終止液50µl，輕(qing)輕(qing)振蕩(dang)，設定(ding)酶標(biao)儀(yi)於450nm處(chu)（建(jian)議用(yong)雙(shuang)波(bo)長(chang)450/630nm檢(jian)測,在(zai)5min內(nei)讀完(wan)數據）測(ce)定(ding)吸光度(du)值（OD值）。

【結果(guo)判(pan)定】

結果(guo)判(pan)定有兩種(zhong)方法，粗略(lve)判(pan)定(ding)可(ke)用第1種(zhong)方法，定量判(pan)定用第2種(zhong)方法。註意樣本(ben)吸光(guang)值與地克(ke)珠(zhu)利(li)的含(han)量成(cheng)負(fu)相(xiang)關。

1、粗(cu)略(lve)判(pan)定(ding)：

用樣本(ben)的平(ping)均(jun)吸光(guang)度(du)值與標(biao)準吸(xi)光(guang)度(du)值比較(jiao)即(ji)可得(de)出其(qi)濃(nong)度(du)範圍(ppb)。假設(she)樣本(ben)1的吸(xi)光度(du)值為0.310， 樣本(ben)2的吸(xi)光度(du)值為0.820，標(biao)準液(ye)吸(xi)光(guang)度(du)值分別是：0ppb為1.610；0.1ppb為1.350；0.3ppb為1.030；0.9ppb為0.660；2.7ppb為0.379；8.1ppb為0.198。則(ze)樣本(ben)1的濃(nong)度(du)範圍是2.7ppb-8.1ppb； 樣本(ben)2的濃(nong)度(du)範圍是0.3ppb-0.9ppb。乘(cheng)以其(qi)對(dui)應的稀(xi)釋(shi)倍數即為樣本(ben)中地(di)克(ke)珠(zhu)利(li)的實際(ji)含(han)量。

2、定量判(pan)定(ding)：

所獲(huo)得(de)的(de)每(mei)個濃(nong)度(du)標準溶(rong)液(ye)和樣本(ben)吸光(guang)度(du)值的平(ping)均(jun)值（B）除以第壹個標準（0標(biao)準）的(de)吸(xi)光(guang)度(du)值（B₀）再乘以100%，即百(bai)分吸光(guang)度(du)值。

B—標(biao)準溶(rong)液(ye)或(huo)樣本(ben)溶液(ye)的平(ping)均(jun)吸光(guang)度(du)值

B₀—0ng/ml標(biao)準溶(rong)液(ye)的(de)平(ping)均(jun)吸光(guang)度(du)值

以(yi)標準品(pin)百(bai)分吸光(guang)率為縱(zong)坐標(biao)，以地克(ke)珠(zhu)利(li)標(biao)準品(pin)濃(nong)度(du)（ng/ml）的半對(dui)數為橫坐標(biao)，繪(hui)制標(biao)準曲(qu)線(xian)圖(tu)。將樣本(ben)的百(bai)分吸光(guang)率代入(ru)標準曲(qu)線(xian)中(zhong)，從標(biao)準曲(qu)線(xian)上(shang)讀出樣本(ben)所對(dui)應的濃(nong)度(du)，乘以其對(dui)應的稀(xi)釋(shi)倍數即為樣本(ben)中地(di)克(ke)珠(zhu)利(li)實際(ji)濃(nong)度(du)。

若(ruo)利(li)用試劑(ji)盒(he)專(zhuan)業(ye)分析(xi)軟件進行(xing)計算(suan)，更(geng)便(bian)於大量(liang)樣品(pin)的準確(que)、快(kuai)速(su)分析(xi)。

3、標準準曲(qu)線(xian)：

B/B0 (%)

                  0.1                 0.3               0.9                2.7               8.1                                                     地克(ke)珠(zhu)利(li)(ppb) 

圖1：地克(ke)珠(zhu)利(li)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)回歸(gui)曲(qu)線(xian)

4、再現性(xing)：

%CV

       0      0.1       0.3      0.9     2.7     8.1

地(di)克(ke)珠(zhu)利(li) (ppb) 

圖2：地(di)克(ke)珠(zhu)利(li)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)的精密度(du)

由(you)多(duo)個不(bu)同(tong)的(de)實驗(yan)結果(guo)確(que)定了精密度(du)，圖2顯(xian)示(shi)出地克(ke)珠(zhu)利(li)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)的精(jing)密(mi)度(du)情況，獲(huo)得(de)的(de)標(biao)準吸(xi)收值的變(bian)異系(xi)數（%CV）對(dui)相(xiang)應地克(ke)珠(zhu)利(li)濃(nong)度(du)作曲線，可(ke)以(yi)看(kan)到在(zai)全(quan)部(bu)範(fan)圍內(nei)變(bian)異系(xi)數如(ru)此(ci)之低，可以得(de)到(dao)很(hen)好(hao)的再現性(xing)。

【註意事項(xiang)】

1、 使(shi)用前將所有試(shi)劑(ji)溫(wen)度(du)回升至室(shi)溫(wen)20-25℃。試(shi)劑(ji)及標(biao)本(ben)沒有(you)回到室溫(wen)（20-25℃）會(hui)導(dao)致(zhi)所有標(biao)準的(de)OD值偏(pian)低(di)。

2、 在(zai)洗板過(guo)程(cheng)中如(ru)果(guo)出現板孔幹(gan)燥(zao)的情況，則(ze)會(hui)伴隨著(zhe)出現標(biao)準曲(qu)線(xian)不(bu)成(cheng)線(xian)性，重(zhong)復(fu)性不(bu)好(hao)的現象(xiang)。所以洗板拍(pai)幹(gan)後(hou)應立即(ji)進行(xing)下(xia)壹步操作。

3、 混(hun)合(he)要(yao)均(jun)勻(yun)，否(fou)則會出現重(zhong)復(fu)性不(bu)好(hao)的現象(xiang)。

4、 反應終止液為2M硫(liu)酸(suan)，避(bi)免(mian)接觸(chu)皮膚(fu)。

5、 不(bu)要(yao)使用過(guo)了(le)有效日(ri)期(qi)的(de)試劑(ji)盒(he)，稀(xi)釋(shi)或攙雜使(shi)用(yong)會(hui)引起(qi)靈敏度(du)、OD值的變(bian)化。不(bu)要(yao)交(jiao)換(huan)使(shi)用不(bu)同(tong)批(pi)號的盒(he)中(zhong)試(shi)劑(ji)。

6、 不(bu)用(yong)的微(wei)孔板放(fang)進自(zi)封(feng)袋密封(feng)；標準物質和無(wu)色的(de)發色劑(ji)對(dui)光(guang)敏(min)感，因此要(yao)避(bi)免(mian)直接暴露(lu)在(zai)光(guang)線(xian)下(xia)。

7、 顯(xian)色液(ye)若(ruo)有任何顏(yan)色表(biao)明(ming)變(bian)質，應當棄(qi)之。0標(biao)準的(de)吸(xi)光(guang)度(du)值小(xiao)於0.5個(ge)單位（A_450nm< 0.5 ）時(shi)，表示(shi)試劑(ji)可能(neng)變(bian)質。

8、 該試(shi)劑(ji)盒(he)最(zui)佳(jia)反應溫(wen)度(du)為25℃，溫(wen)度(du)過(guo)高(gao)或過(guo)低(di)將導(dao)致(zhi)檢測吸光度(du)值和靈敏度(du)發生變(bian)化。

【儲(chu)存(cun)】

原包裝(zhuang)應儲(chu)存(cun)於2～8℃保鮮(xian)冷藏(zang)，切(qie)勿(wu)冷凍(dong)。

【有(you)效期】

  有(you)效期12個月(yue);生產日(ri)期(qi)、有(you)效期、生產批(pi)號見(jian)外包裝(zhuang)。