地塞米(mi)松(song)檢測試劑(ji)盒(he)說(shuo)明書

地塞米(mi)松(song)快速(su)檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

（豬牛羊(yang)組(zu)織(zhi)專用(yong)）使用(yong)說(shuo)明書

【測定原理(li)】

        本試(shi)劑(ji)盒(he)采(cai)用間(jian)接(jie)競爭ELISA方(fang)法，在微孔(kong)條上(shang)預包被(bei)偶(ou)聯(lian)抗原，樣本(ben)中的(de)殘(can)留(liu)物(wu)地塞米(mi)松(song)將(jiang)和(he)微(wei)孔條上預包被(bei)的(de)偶(ou)聯(lian)抗原競爭抗地塞米(mi)松(song)抗體，加入酶(mei)標(biao)記(ji)物(wu)後，用TMB底物(wu)顯(xian)色，樣本(ben)吸(xi)光值(zhi)與其所(suo)含(han)殘(can)留(liu)物(wu)地塞米(mi)松(song)的含(han)量成負(fu)相關，與(yu)標準(zhun)曲(qu)線比(bi)較即可(ke)得(de)出(chu)相應(ying)殘(can)留(liu)物(wu)地塞米(mi)松(song)的含(han)量。

【試劑(ji)盒(he)技(ji)術指標】   

規      格(ge)：96孔/盒(he)

靈(ling) 敏 度(du)： 0.1ppb

檢測時間(jian)： 45min

樣本(ben)檢測下限(xian)：

組(zu)織(zhi) ………………………………………0.3ppb

交叉(cha)反應(ying)率：

地塞米(mi)松(song)……………………………………100%

樣本(ben)回收(shou)率(lv)：

組(zu)織(zhi) …………………………………85%±10%

【試劑(ji)盒(he)組(zu)成】

1、 微量(liang)測試孔(kong)：1×96孔板（12條×8孔）

2、 標準(zhun)溶(rong)液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb

3、 酶標(biao)記(ji)物(wu)       7ml………………………紅色帽(mao)

4、 抗體工作(zuo)液   7ml ………………………綠色帽(mao)

5、 底物(wu)A液      7ml ………………………棕(zong)色帽(mao)

6、 底物(wu)B液     7ml  …………………… 黑色帽(mao)

7、 終  止  液     7ml  …………………… 黃色帽(mao)

8、 10X濃(nong)縮洗滌(di)液(ye)40 ml  ……………… 白色帽(mao)

9、 2X 濃(nong)縮復溶(rong)液  50ml ·………………  藍色帽(mao)

【所(suo)用(yong)儀器(qi)、試(shi)劑(ji)】   

具備(bei)的儀(yi)器(qi)：微(wei)孔(kong)酶標(biao)儀、打印(yin)機(ji)、均(jun)質(zhi)器 、氮(dan)氣(qi)吹幹裝(zhuang)置(zhi)、

振蕩(dang)器、離(li)心(xin)機(ji)、刻度(du)移液(ye)管(guan)、天平(ping)（感(gan)量(liang)0.01g）

微量(liang)移液(ye)器(qi)：單道(dao)20µl-200µl，100µl-1000µl、多道(dao)250µl

（2）試劑(ji)：乙(yi)腈、正(zheng)己烷(wan)、氯化鈉

【實(shi)驗(yan)前(qian)溶(rong)液配(pei)制】

配液(ye)1、1×復溶(rong)液：

                將(jiang)2×濃(nong)縮復溶(rong)液用(yong)去(qu)離(li)子水(shui)以(yi)1：1稀釋（1份(fen)1×濃(nong)縮復溶(rong)液+1份(fen)去(qu)離(li)子水(shui)），用(yong)於(yu)樣本(ben)提(ti)取和(he)稀釋。

配液(ye)2、將(jiang)40ml濃(nong)縮洗滌(di)液(ye)（10倍濃(nong)縮）用(yong)去(qu)離(li)子水(shui)按(an)照 1：9稀釋（1份(fen)濃(nong)縮洗滌(di)液(ye)+9份(fen)去(qu)離(li)子水(shui)），或按(an)所(suo)需(xu)用(yong)量配制洗滌(di)液(ye)。

【樣本(ben)前(qian)處(chu)理(li)步(bu)驟(zhou)】   

樣本(ben)前(qian)處(chu)理(li)須知(zhi)

處理(li)任何(he)樣本(ben)時，都必(bi)須註(zhu)意：

（1）本試(shi)劑(ji)盒(he)適(shi)用(yong)於(yu)檢(jian)測豬牛羊(yang)組(zu)織(zhi)樣本(ben)。

（2）實(shi)驗(yan)中必(bi)須使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)吸(xi)頭(tou)，在吸(xi)取(qu)不(bu)同(tong)的試(shi)劑(ji)時要(yao)更(geng)換(huan)吸(xi)頭(tou)。

（3）實(shi)驗(yan)之前(qian)須檢(jian)查(zha)各(ge)種實(shi)驗(yan)器具是否幹凈，必(bi)要(yao)時(shi)可(ke)對(dui)實(shi)驗(yan)器具進行清潔，以(yi)避免汙染(ran)幹擾(rao)實(shi)驗(yan)結果。

（A）  組(zu)織(zhi)樣本(ben)處理(li)方(fang)法

1、 用均(jun)質(zhi)器均(jun)質(zhi)樣本(ben)；稱取(qu)3±0.05g樣本(ben)於50ml離心(xin)管(guan)中，加入1g氯化鈉，再加入6ml乙(yi)腈，用振蕩(dang)器振(zhen)蕩(dang)5分鐘(zhong)；4000轉/分以(yi)上,室溫離心(xin)5分鐘(zhong)；

2、 取上(shang)清液2ml至幹凈(jing)玻璃試(shi)管中，於(yu)65℃水(shui)浴(yu)下(xia)氮(dan)氣(qi)/空氣(qi)吹幹；

3、 加入1ml正己烷(wan)溶(rong)解幹燥(zao)的(de)殘(can)留(liu)物(wu)，再加1ml配好的(de)1×復溶(rong)液強烈(lie)振蕩(dang)混合30s，室溫4000r/min以(yi)上離(li)心(xin)3分鐘(zhong)。

4、 取50 µl下層(ceng)清亮液(ye)體用於(yu)分析(xi)。

樣本(ben)稀釋倍數(shu)：1  

【酶標(biao)免疫分析(xi)程序(xu)】

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)：

1、 從4℃冷(leng)藏環(huan)境中取(qu)出(chu)所(suo)需(xu)試(shi)劑(ji)，置室(shi)溫（20-25℃）平衡30min以(yi)上，註(zhu)意每(mei)種液體試劑(ji)使用(yong)前(qian)均(jun)須搖(yao)勻。

2、 取出(chu)需(xu)要(yao)數(shu)量(liang)的微孔(kong)及框架(jia)，將(jiang)不(bu)用的微孔(kong)放(fang)入自(zi)封(feng)袋，保存(cun)於2-8℃。

3、 編(bian)號(hao)：將(jiang)樣本(ben)和(he)標(biao)準(zhun)品對應(ying)微孔(kong)按(an)序編(bian)號(hao)，每(mei)個(ge)樣本(ben)和(he)標(biao)準(zhun)品做(zuo)2孔平(ping)行，並記(ji)錄標(biao)準(zhun)孔(kong)和(he)樣本(ben)孔所(suo)在的位(wei)置(zhi)。

4、 加標(biao)準(zhun)品/樣本(ben)50µl /孔，然(ran)後加酶標記(ji)物(wu)50μl/孔，再加入抗體工作(zuo)液50µl/孔。輕輕振(zhen)蕩混勻，用蓋板膜(mo)蓋板，25℃環境(jing)避光反應(ying)30分鐘(zhong)。

5、 取出(chu)將(jiang)孔內液體甩幹，用洗液(ye)250µl/孔洗板4-5次(ci)，每(mei)次(ci)間(jian)隔(ge)15-30秒，用(yong)吸(xi)水(shui)紙拍幹(gan)（拍幹(gan)後未(wei)被(bei)清除的氣(qi)泡可(ke)用(yong)幹凈的槍(qiang)頭(tou)刺(ci)破(po)）。

6、 顯色：每(mei)孔(kong)加入底(di)物(wu)A液50ul，再加底物(wu)B液50ul，輕輕振(zhen)蕩混勻，25℃環境(jing)中避光顯(xian)色15min。

7、 測定：每(mei)孔(kong)加入終(zhong)止液50µl，輕輕振(zhen)蕩混勻，設定酶標(biao)儀(yi)於450nm處（建(jian)議(yi)用(yong)雙波長450/630nm檢測，在5min內讀(du)完數(shu)據(ju)），測定每(mei)孔(kong)OD值。

【結果判(pan)定】

結果判(pan)定有(you)兩種方(fang)法，粗(cu)略(lve)判(pan)定可(ke)用(yong)第1種方(fang)法，定量判(pan)定用第2種方(fang)法。註意樣本(ben)吸(xi)光值(zhi)與其所(suo)含(han)地塞米(mi)松(song)的含(han)量成負(fu)相關。

1、粗(cu)略(lve)判(pan)定：

     用樣本(ben)的平(ping)均(jun)吸(xi)光度(du)值(zhi)與標準(zhun)吸(xi)光度(du)值比(bi)較即可(ke)得(de)出(chu)其濃(nong)度(du)範(fan)圍(ppb)。假設樣本(ben)1的吸(xi)光度(du)值(zhi)為0.310， 樣本(ben)2的吸(xi)光度(du)值(zhi)為0.820，標準(zhun)液(ye)吸(xi)光度(du)值(zhi)分別(bie)是：0ppb為1.850；0.1ppb為1.440；0.3ppb為1.080；0.9ppb為0.710；2.7ppb為0.359；8.1ppb為0.201。則樣本(ben)1的濃(nong)度(du)範(fan)圍是(shi)2.7ppb-8.1ppb； 樣本(ben)2的濃(nong)度(du)範(fan)圍是(shi)0.3ppb-0.9 ppb。乘(cheng)以(yi)其對應(ying)的稀釋倍數(shu)即為樣本(ben)中地塞米(mi)松(song)實(shi)際含(han)量。

2、定量分析(xi)

（1）百分吸(xi)光率(lv)的計(ji)算(suan)，標(biao)準(zhun)品或樣本(ben)的百分吸(xi)光率(lv)等(deng)於標(biao)準(zhun)品或樣本(ben)的百分吸(xi)光度(du)值(zhi)的平均(jun)值(zhi)（雙孔）除以(yi)第壹(yi)個標(biao)準(zhun)（0標準(zhun)）的(de)吸(xi)光度(du)值(zhi)，再乘(cheng)以(yi)100%，即：

B—標準(zhun)溶(rong)液或樣本(ben)溶(rong)液的(de)平(ping)均(jun)吸(xi)光度(du)值(zhi)

B₀—0ng/ml標準(zhun)溶(rong)液的(de)平(ping)均(jun)吸(xi)光度(du)值(zhi)

（2）標準(zhun)曲(qu)線的(de)繪(hui)制與計(ji)算(suan)

以(yi)標準(zhun)品百分吸(xi)光率(lv)為縱坐(zuo)標，以(yi)金(jin)剛烷(wan)胺濃(nong)度(du)（ng /ml）的半對數為橫坐(zuo)標，繪(hui)制標準(zhun)曲(qu)線圖。將(jiang)樣本(ben)的百分吸(xi)光率(lv)代(dai)入標(biao)準(zhun)曲(qu)線中，從(cong)標(biao)準(zhun)曲(qu)線上(shang)讀(du)出(chu)樣本(ben)所(suo)對(dui)應(ying)的濃(nong)度(du)，乘(cheng)以(yi)其對應(ying)的稀釋倍數(shu)即為樣本(ben)中金(jin)剛烷(wan)胺實(shi)際含(han)量。

若利(li)用試(shi)劑(ji)盒(he)專(zhuan)業分析(xi)軟件進行計(ji)算(suan)，更(geng)便(bian)於(yu)大(da)量樣本(ben)的準(zhun)確(que)、快速(su)分析(xi)。（歡迎(ying)來(lai)電(dian)索(suo)取）   

3、標準(zhun)準(zhun)曲(qu)線：

B/B0 (%)

                 0.1                 0.3                 0.9                2.7                 8.1                   

地塞米(mi)松(song)(ppb) [µg/kg]

圖1：地塞米(mi)松(song)檢測試劑(ji)盒(he)的(de)回歸曲線

4、再現(xian)性(xing)：

%CV

       0       0.1      0.3            0.9          2.7           8.1       

地塞米(mi)松(song)(ppb) [µg/kg]

圖2：地塞米(mi)松(song)檢測試劑(ji)盒(he)的(de)精密度(du)

由多(duo)個不(bu)同(tong)的實(shi)驗(yan)結果確(que)定了(le)精(jing)密度(du)，圖2顯(xian)示(shi)出(chu)地塞米(mi)松(song)檢測試劑(ji)盒(he)的精(jing)密度(du)情(qing)況(kuang)，獲(huo)得(de)的(de)標(biao)準(zhun)吸(xi)收(shou)值(zhi)的(de)變(bian)異系(xi)數(shu)（%CV）對(dui)相應(ying)地塞米(mi)松(song)濃(nong)度(du)作(zuo)曲線，可(ke)以(yi)看到(dao)在全部範圍內變異系(xi)數(shu)如(ru)此之低，可(ke)以(yi)得(de)到(dao)很(hen)好的(de)再現(xian)性(xing)。

【註意事項(xiang)】

1、 使用(yong)前(qian)將(jiang)所(suo)有(you)試劑(ji)溫度(du)回升(sheng)至室溫20-25℃。試劑(ji)及標本(ben)沒有(you)回到室(shi)溫（20-25℃）會導(dao)致(zhi)所(suo)有(you)標準(zhun)的(de)OD值偏(pian)低。

2、 在洗板過(guo)程(cheng)中如(ru)果出(chu)現(xian)板孔幹(gan)燥(zao)的情(qing)況(kuang)，則(ze)會(hui)伴(ban)隨著出(chu)現(xian)標(biao)準(zhun)曲(qu)線不(bu)成線性(xing)，重(zhong)復性(xing)不(bu)好的(de)現(xian)象。所(suo)以(yi)洗板拍幹(gan)後應(ying)立即進行(xing)下(xia)壹(yi)步(bu)操(cao)作(zuo)。

3、 混合要(yao)均(jun)勻(yun)，否則會出(chu)現(xian)重(zhong)復性(xing)不(bu)好的(de)現(xian)象。

4、 反應(ying)終止液為2M硫酸(suan)，避免接觸皮(pi)膚。

5、 不(bu)要(yao)使(shi)用(yong)過(guo)了(le)有(you)效(xiao)日期(qi)的試(shi)劑(ji)盒(he)，稀釋或攙(chan)雜(za)使(shi)用(yong)會引起靈(ling)敏度(du)、OD值(zhi)的變化。不(bu)要(yao)交(jiao)換(huan)使(shi)用(yong)不(bu)同(tong)批號(hao)的(de)盒(he)中試(shi)劑(ji)。

6、 不(bu)用的微孔(kong)板放(fang)進(jin)自封(feng)袋密封(feng)；標(biao)準(zhun)物(wu)質(zhi)和(he)無(wu)色的(de)發色劑(ji)對光敏感(gan)，因(yin)此(ci)要(yao)避免直接(jie)暴(bao)露在光線下(xia)。

7、 顯色液(ye)若有(you)任何顏(yan)色表(biao)明變(bian)質(zhi)，應(ying)當棄之。0標準(zhun)的(de)吸(xi)光度(du)值(zhi)小於0.5個(ge)單(dan)位(wei)（A450nm< 0.5 ）時(shi)，表(biao)示(shi)試(shi)劑(ji)可(ke)能變(bian)質(zhi)。

8、 該(gai)試劑(ji)盒(he)最佳反應(ying)溫度(du)為25℃，溫度(du)過(guo)高(gao)或過(guo)低將(jiang)導(dao)致(zhi)檢測吸(xi)光度(du)值(zhi)和(he)靈(ling)敏度(du)發(fa)生變(bian)化。

【儲(chu)存(cun)】原包(bao)裝(zhuang)應(ying)儲(chu)存(cun)於(yu)2～8℃保鮮(xian)冷(leng)藏，切勿冷(leng)凍。

【有(you)效(xiao)期(qi)】有(you)效(xiao)期(qi)12個月;生產日期(qi)、有(you)效(xiao)期(qi)、批號(hao)見外包裝(zhuang)。