鯉春(chun)病(bing)毒血(xue)癥SVCVPCR檢測(ce)試(shi)劑盒說(shuo)明(ming)

【產品名(ming)稱】

通用名(ming)稱：鯉春(chun)病(bing)毒血(xue)癥SVCV檢測(ce)試(shi)劑盒（實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)PCR法(fa)）

英文名(ming)稱：：SpringViraemia of Carp Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(gui)格(ge)】25T/盒 & 50T/盒

【預期用途(tu)】

本試(shi)劑盒利(li)用(yong)實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)PCR原理(li)，定(ding)性檢測(ce)鯉春(chun)病(bing)毒血(xue)癥SVCV，對鯉春(chun)病(bing)毒血(xue)癥SVCV的診斷(duan)及(ji)療(liao)效評估有重(zhong)要(yao)指(zhi)導(dao)意義(yi)。

【檢驗(yan)原理(li)】

本試(shi)劑盒針對鯉春(chun)病(bing)毒血(xue)癥SVCV的高(gao)度保守區(qu)域設(she)計特異性引物和(he)探(tan)針，在(zai)反(fan)應體系中含鯉春(chun)病(bing)毒血(xue)癥SVCV基因組模板(ban)的情況下(xia)，PCR反應得以(yi)進行並(bing)釋放熒(ying)光(guang)信號。利用熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實(shi)時(shi)監測(ce)和(he)輸(shu)出，實(shi)現(xian)檢測(ce)結果(guo)的定(ding)性分析。

【主要組成(cheng)成(cheng)份】

註：陰(yin)性對照為滅菌純水(shui)，陽(yang)性對照為含高(gao)致病性豬藍(lan)耳病(bing)靶基因(yin)的質粒(li)。

【儲存條(tiao)件(jian)及(ji)有效期】避(bi)光-20℃以(yi)下保(bao)存，避(bi)免反(fan)復凍(dong)融，有效期12個(ge)月。

【適用儀器(qi)】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler 480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州(zhou)博(bo)日系列等多(duo)通道實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀。

【樣(yang)本要(yao)求】

1對於有臨(lin)床(chuang)癥狀(zhuang)的魚，如(ru)體長(chang)不(bu)大(da)於(yu)4cm，取(qu)整(zheng)條魚(yu)，體(ti)長(chang)4~6cm的魚，取(qu)內臟(zang)（包(bao)括腎(shen)）；體長(chang)大(da)於(yu)6cm 的魚則(ze)取(qu)腦(nao)、肝(gan)、腎、脾(pi)；對於無(wu)癥狀(zhuang)的魚，取(qu)腎、脾(pi)、腮(sai)和腦(nao)組織，成(cheng)熟(shu)雌魚還(hai)需取(qu)卵巢液。

【檢驗(yan)方(fang)法(fa)】

1. 試(shi)劑準備(bei)（試(shi)劑準備(bei)區(qu)）

（1）從(cong)冰箱中取(qu)出試(shi)劑盒, 從(cong)試(shi)劑盒中取(qu)出實(shi)驗(yan)所(suo)需(xu)試(shi)劑，充分融化(hua)混(hun)勻並瞬時(shi)離心以(yi)去除(chu)管壁附(fu)著(zhe)液體。

（2）核算當次實(shi)驗(yan)所(suo)需(xu)要的反應數(shu)（n），並根據如(ru)下表(biao)所(suo)示反(fan)應體系計算當(dang)次實(shi)驗(yan)所(suo)需(xu)要的各種試(shi)劑量。

n =陰(yin)性對照數(shu)（1T）+陽(yang)性對照數(shu)（1T）+誤差(cha)預留(liu)量(liang)（1T）+樣(yang)本數(shu)

（3）在(zai)無(wu)菌離心管中加入(ru)上述(shu)試(shi)劑，充分混勻後(hou)瞬(shun)時(shi)離心。按照(zhao)20μL/管分裝量(liang)將(jiang)試(shi)劑分裝至PCR反應管。

2.樣(yang)本準(zhun)備（樣(yang)本處理(li)區(qu)）

用DNA/RNA提取(qu)試(shi)劑盒提(ti)取(qu)核酸即可，具體操作按照(zhao)其試(shi)劑盒說(shuo)明(ming)書操作。

3.加樣(yang)（樣(yang)本處理(li)區(qu)）

在(zai)上述(shu)制備(bei)好的PCR反應樣(yang)本管(guan)中分別(bie)加入處理(li)好的待測(ce)標本RNA各5 μL、終體積(ji)25 μL/管，蓋好PCR反應蓋混勻後(hou)瞬(shun)時(shi)低(di)速離心，轉移(yi)到PCR儀器(qi)上。陰(yin)性對照和(he)陽(yang)性對照管(guan)則(ze)各加5 μL試(shi)劑盒自(zi)帶(dai)的陰(yin)性對照或(huo)陽(yang)性對照品(pin)，終體積(ji)為25 μL/管，蓋好PCR反應蓋混勻後(hou)瞬(shun)時(shi)低(di)速離心，轉移(yi)到PCR儀器(qi)上。

4.PCR（PCR擴(kuo)增區(qu)）

 （1）取(qu)樣(yang)本處理(li)區(qu)準(zhun)備(bei)好的PCR反應管，放置在(zai)實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀樣(yang)品槽(cao)相應位置，並記(ji)錄放置(zhi)順(shun)序(xu)。

（2）按下表(biao)設置(zhi)儀器(qi)核酸擴(kuo)增相(xiang)關(guan)參(can)數(shu)進行PCR擴(kuo)增。

 註：ABI系列熒(ying)光(guang)PCR儀在(zai)設(she)置時(shi)不(bu)選(xuan)ROX校(xiao)正(zheng)，設置(zhi)淬滅(mie)基(ji)團選(xuan)擇None。

【參(can)考(kao)值（參(can)考(kao)範(fan)圍(wei)）】

1.試(shi)劑盒有效性判(pan)定(ding)：

（1）陽(yang)性對照：有典(dian)型(xing)S型擴(kuo)增曲(qu)線(xian)或(huo)Ct值≤35。

（2）陰(yin)性對照：Ct值＞38或(huo)無(wu)Ct值，線形為直線(xian)或(huo)輕(qing)微(wei)斜(xie)線(xian)，無(wu)指(zhi)數(shu)增(zeng)長期(qi)。

2.標本結果(guo)判(pan)定(ding)：

（1）陽(yang)性：標本檢測(ce)結果(guo)Ct值≤35或(huo)有明(ming)顯(xian)指(zhi)數(shu)增(zeng)長期(qi)。

（2）可疑(yi)：標本檢測(ce)結果(guo)Ct值在(zai)35～38範(fan)圍(wei)內。此(ci)時(shi)應對標本進行重(zhong)復檢測(ce)，如(ru)重(zhong)復實(shi)驗(yan)結果(guo)Ct值仍在(zai)35～38範(fan)圍(wei)內，有明(ming)顯(xian)指(zhi)數(shu)增(zeng)長期(qi)，則(ze)判(pan)定(ding)為陽(yang)性，否則(ze)為陰(yin)性。

（3）陰(yin)性：標本檢測(ce)結果(guo)Ct值＞38或(huo)無(wu)Ct值。

【檢驗(yan)結果(guo)的解釋(shi)】

【檢驗(yan)方(fang)法(fa)的局限(xian)性】

1. 當檢測(ce)樣(yang)本中被檢核(he)酸濃(nong)度(du)低於本試(shi)劑盒的最di檢出限(xian)shi可能會(hui)發(fa)生(sheng)假(jia)陰(yin)性的結果(guo)。

2. 被檢樣(yang)本在(zai)采(cai)集、運(yun)輸、儲存以(yi)及(ji)處理(li)過程(cheng)中操作方(fang)式不(bu)當容易(yi)造成(cheng)RNA降解而(er)產(chan)生(sheng)假(jia)陰(yin)性結果(guo)。

3. 樣(yang)本在(zai)采(cai)集、運(yun)輸、儲存以(yi)及(ji)處理(li)過程(cheng)中發(fa)生(sheng)交(jiao)叉汙(wu)染，則(ze)容易(yi)得(de)到假(jia)陽(yang)性結果(guo)。

【產品性能指(zhi)標】產品的最di檢出限(xian)為10³ Copies/mL，產品CV值≤3%。

【註意事項】

1. 使用(yong)本試(shi)劑盒的實(shi)驗(yan)室(shi)，應嚴(yan)格(ge)按照(zhao)國家有關(guan)部(bu)分頒布的有關(guan)基(ji)因(yin)擴(kuo)增檢驗(yan)實(shi)驗(yan)室(shi)管(guan)理(li)規範(fan)進行管(guan)理(li)；

2. 為避(bi)免RNA降解，樣(yang)本處理(li)過程(cheng)應在(zai)0-4℃條件下操作，且完成(cheng)實(shi)驗(yan)後(hou)立(li)即(ji)上機檢測(ce)；樣(yang)本處理(li)過程(cheng)中使用(yong)的器具耗材(cai)應經過無(wu)核(he)酶(mei)處理(li)；

3. 各區(qu)域物(wu)品均為專用，不(bu)得交(jiao)叉使用(yong)，以(yi)免汙(wu)染；檢測(ce)結束後(hou)，應立(li)即(ji)對工作臺清(qing)潔(jie)；

4. 吸取(qu)反應液時(shi)，應盡量避(bi)免產(chan)生(sheng)氣泡；上 PCR 儀前，應註意檢查各反應管是否蓋緊，以(yi)免液體蒸(zheng)發(fa)造成(cheng)結果(guo)不(bu)準確；

5. 試(shi)劑盒所(suo)有試(shi)劑在(zai)使用(yong)前應該(gai)在(zai)常溫下(xia)充分融化(hua)混(hun)勻，並應瞬時(shi)離心；

6. 試(shi)劑盒內所(suo)配陰(yin)性和陽(yang)性對照在(zai)第(di)壹次使用(yong)前應全部(bu)轉移(yi)至標本準(zhun)備(bei)區(qu)，並(bing)單(dan)獨存放(fang)；

7. 為防(fang)止熒(ying)光(guang)幹(gan)擾，應避(bi)免裸(luo)手(shou)直接接觸PCR反應管，並應避(bi)免在(zai)PCR反應管上進行任(ren)何標記(ji)；

8. 檢測(ce)過(guo)程(cheng)中使用(yong)過的吸頭，應直接打(da)到盛(sheng)有 10%次氯(lv)酸的廢物缸(gang)內，檢測(ce)結束的PCR 反應管，切忌開(kai)蓋，並與(yu)其他廢棄物品(pin)壹同(tong)滅菌後(hou)丟(diu)棄；工作臺及(ji)各種實(shi)驗(yan)用(yong)品(pin)應定(ding)期用(yong) 10%次氯(lv)酸、75%酒(jiu)精或(huo)紫(zi)外燈進行消毒；

9. 儀器(qi)擴(kuo)增相(xiang)關(guan)參(can)數(shu)應按照本說(shuo)明(ming)書相關要求進行設(she)置；不(bu)同(tong)批號試(shi)劑不(bu)能混(hun)用；並在(zai)有效期內使用(yong)。