地(di)塞(sai)米松(song)ELISA檢(jian)測試劑盒說明(ming)書

地(di)塞(sai)米松(song)快速檢(jian)測試劑盒

使用說明(ming)書

【原(yuan)理】

本(ben)試(shi)劑盒是利(li)用競爭(zheng)ELISA方(fang)法(fa)，在(zai)酶標板微孔(kong)上預(yu)包(bao)被(bei)抗(kang) 地(di)塞(sai)米松(song)抗(kang)原。檢(jian)測時，加入(ru)標準品或樣品溶(rong)液，地(di)塞米松(song)抗(kang)體(ti)及(ji)酶標記物(wu)，包(bao)被(bei)抗(kang)原和(he)加入(ru)樣本(ben)中的地(di)塞(sai)米松(song)競爭(zheng)性地與地(di)塞(sai)米松(song)抗(kang)體(ti)結(jie)合(he)後(hou)，再(zai)與酶標記物(wu)形成抗(kang)原抗(kang)體(ti)復(fu)合(he)物(wu)，用TMB底物顯(xian)色(se)；加入(ru)反應(ying)終(zhong)止(zhi)液，在(zai)450nm波(bo)長(chang)酶標儀(yi)下進行檢(jian)測，樣品中的地(di)塞(sai)米松(song)濃(nong)度(du)與吸(xi)收(shou)光(guang)強(qiang)度(du)成反比。

【適(shi)用範圍(wei)】

本(ben)試(shi)劑盒是應(ying)用ELISA技(ji)術(shu)研(yan)發的藥物殘留檢(jian)測產品,與儀(yi)器分(fen)析(xi)技(ji)術(shu)比(bi)較，能經濟(ji)、快速地(di)檢(jian)測出(chu)肌(ji)肉、肝(gan)臟等中的地(di)塞(sai)米松(song)類藥物。

【試(shi)劑盒技術指(zhi)標】  

規(gui)      格(ge)：96孔(kong)/盒(he)

靈(ling) 敏 度(du)： 0.1ppb

檢(jian)測時間： 75min

樣本(ben)檢(jian)測下限：

組(zu)織(zhi)、蜂(feng)蜜………………………………………… 0.2ppb

牛(niu)奶(nai)………………………………………………… 4ppb

樣本(ben)回收(shou)率(lv)

組(zu)織(zhi)、蜂(feng)蜜……………………………………80% ±10%

牛(niu)奶(nai)……………………………………………85% ±10%

交叉(cha)反應(ying)率

地(di)塞(sai)米松(song)………………………………………………100%

倍(bei)他(ta)米松(song)………………………………………………80%

氟美(mei)松(song)…………………………………………………55%

氫(qing)化(hua)可的松(song)……………………………………………6%

皮(pi)質酮(tong)…………………………………………小於(yu)0.1%

【試(shi)劑盒組成】  

1、 微(wei)量(liang)測試孔(kong)：1×96孔(kong)板(ban)（12條(tiao)×8孔(kong)）

2、 標準品溶(rong)液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb

3、 高(gao)濃(nong)度(du)標準品：×1瓶：（1ml/瓶）100ppb

4、 酶標記物(wu)       12ml………………………紅(hong)色(se)帽(mao)

5、 抗(kang)體(ti)工作液   7ml ………………………綠(lv)色(se)帽(mao)

6、 底物A液      7ml ………………………棕(zong)色(se)帽(mao)

7、 底物B液     7ml  ……………………黑(hei)色(se)帽(mao)

8、 終(zhong)  止(zhi)  液     7ml  ……………………黃(huang)色帽

9、 20X濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液40 ml  ………………白(bai)色(se)帽(mao)

10、 2X 濃(nong)縮(suo)復(fu)溶(rong)液   50ml ·………………藍(lan)色(se)帽(mao)

【所用儀(yi)器、試劑】  

儀(yi)          器：微孔(kong)板(ban)酶標儀(yi)450nm/630nm、旋(xuan)轉蒸(zheng)發儀(yi)/氮(dan)氣(qi)吹(chui)幹(gan)裝(zhuang)置、均(jun)質器、振(zhen)蕩(dang)器、離(li)心(xin)機、 刻度(du)移(yi)液管(guan)、天平(ping)（感(gan)量(liang)0.01g ）

微(wei)量(liang)移(yi)液器：單(dan)道 20µl～200µl、100µl～1000µl、多(duo)道 250µl

試(shi)           劑：乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯(zhi)、NaOH、正(zheng)己烷

【實(shi)驗(yan)前(qian)溶(rong)液配(pei)制(zhi)】

配(pei)液1、0.1M氫(qing)氧(yang)化(hua)鈉溶(rong)液

         稱0.4gNaOH加去(qu)離子水(shui)混(hun)勻(yun)溶(rong)解，定容至100ml

配(pei)液2、將(jiang)2X濃(nong)縮(suo)復(fu)溶(rong)液用去(qu)離子水(shui)按(an)照(zhao)1：1稀(xi)釋(shi)（1 份(fen)濃(nong)縮(suo)復(fu)

溶(rong)液+1份(fen)去(qu)離子水(shui)）用於(yu)樣本(ben)的復(fu)溶(rong)。

配(pei)液3、將(jiang)40ml濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液（20倍(bei)濃(nong)縮(suo)）用去(qu)離子水(shui)按(an)照(zhao) 1：19

稀(xi)釋(shi)（1份(fen)濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液+19份(fen)去(qu)離水(shui)）; 或按所需(xu)用量(liang)配(pei)制(zhi)

洗(xi)滌(di)液

【樣本(ben)前(qian)處(chu)理步(bu)驟】  

處(chu)理任(ren)何(he)樣本(ben)時，都(dou)必(bi)須註(zhu)意(yi)：

（1）實(shi)驗(yan)中必(bi)須使用壹(yi)次性吸(xi)頭(tou)，在(zai)吸(xi)取(qu)不(bu)同(tong)的試(shi)劑時要(yao)更換(huan)吸(xi)頭(tou)。

（2）實(shi)驗(yan)之(zhi)前(qian)須檢(jian)查實(shi)驗(yan)器具(ju)是否(fou)幹凈(jing)，必(bi)要(yao)時可(ke)對(dui)實(shi)驗(yan)器具(ju)進(jin)行清潔(jie)，以避(bi)免汙(wu)染幹(gan)擾(rao)實(shi)驗(yan)結(jie)果。

（a ）動(dong)物(wu)組(zu)織、蜂(feng)蜜

1、稱2.0±0.05g 均(jun)質過(guo)的樣本(ben)於(yu)50ml離(li)心(xin)管(guan)中；

2、加入(ru)3ml 0.1M氫(qing)氧(yang)化(hua)鈉溶(rong)液，充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)1分(fen)鐘(zhong)

3、加入(ru)4 ml乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯(zhi)充分(fen)振(zhen)蕩(dang)5分(fen)鐘(zhong)，室溫4000r/min，離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)；

4、取(qu)2ml清澈上層(ceng)有(you)機相(xiang)至幹(gan)凈(jing)玻(bo)璃(li)試(shi)管(guan)中，56℃水(shui)浴(yu)氮(dan)氣(qi)/空(kong)氣(qi)吹(chui)幹(gan)；

5、加1ml正(zheng)已烷振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)，再(zai)加入(ru)1ml復(fu)溶(rong)工作液充(chong)分(fen)振(zhen)蕩(dang)混(hun)合(he)30秒(miao)；室溫4000轉/分(fen)，離(li)心(xin)5分(fen)鐘(zhong)；

6、去(qu)除上層(ceng)有(you)機相(xiang)，取(qu)下層(ceng)50µl液體(ti)用於(yu)分(fen)析(xi)

     樣本(ben)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)：1

（b）牛(niu)奶(nai)樣品處(chu)理方(fang)法

脫(tuo)脂(zhi)牛奶(nai)

1、取(qu)出(chu)50μl 脫(tuo)脂(zhi)牛奶(nai)於(yu)另(ling)壹(yi)試(shi)管中，加入(ru)1950μl樣本(ben)稀(xi)

  釋(shi)液，混(hun)合30s；

2、取(qu)50 μl 用於(yu)分(fen)析(xi)

脂(zhi)肪奶(nai)

3、確(que)吸(xi)取(qu)1ml 牛(niu)奶(nai)樣本(ben)於(yu)離(li)心(xin)管(guan)中；於(yu)15℃環境(jing)

3000r/min，離(li)心(xin)10min；（如(ru)果(guo)沒(mei)有(you)冷凍離心(xin)機請(qing)預(yu)

先(xian)冷卻後(hou)再(zai)離(li)心)

4、取(qu)出(chu)50μl 牛(niu)奶(nai)於(yu)另(ling)壹(yi)試(shi)管中，加入(ru)1950μl樣本(ben)稀(xi)

  釋(shi)液，混(hun)合30s；

5、取(qu)50 μl 用於(yu)分(fen)析(xi)

  樣本(ben)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu): 40 倍(bei)

【酶標免疫分(fen)析(xi)程(cheng)序】  

操(cao)作步(bu)驟：

1、 從4℃冷藏(zang)環境(jing)中取(qu)出(chu)所需(xu)試(shi)劑，置室 溫（20-25℃）平(ping)衡30min以(yi)上，註(zhu)意(yi)每(mei)種液體(ti)試(shi)劑使用前(qian)均(jun)須搖(yao)勻。

2、 取(qu)出(chu)框(kuang)架及(ji)需(xu)要(yao)數(shu)量(liang)的微(wei)孔(kong)，將(jiang)不用的微(wei)孔(kong)放(fang)入(ru)自封袋(dai)，保存於(yu)2-8℃。

3、 編號(hao)：將(jiang)樣本(ben)和(he)標準品對(dui)應(ying)微(wei)孔(kong)按(an)序編號(hao)，每(mei)個樣本(ben)和(he)標準品做2孔(kong)平(ping)行(xing)，並(bing)記錄(lu)標準孔(kong)和(he)樣本(ben)孔(kong)所在(zai)的位(wei)置

4、 加標準品或樣本(ben)50µl/孔(kong)到(dao)各(ge)自的微(wei)孔(kong)中，然後(hou)加抗(kang)體(ti)50µl/孔(kong)，用蓋板膜(mo)封板(ban)，輕輕(qing)振蕩混勻(yun)。25℃環境(jing)中反(fan)應(ying)30min。

5、 取(qu)出(chu)將(jiang)孔(kong)內液體(ti)甩幹，用洗液250µl /孔(kong)，洗(xi)板4－5次，每(mei)次間隔(ge)15-30s，用吸(xi)水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹（拍(pai)幹後(hou)未被(bei)清除的氣(qi)泡(pao)可(ke)用幹凈(jing)的槍(qiang)頭(tou)刺(ci)破(po)）。

6、 每(mei)孔(kong)加入(ru)酶標記物(wu)100µl，蓋板膜(mo)蓋板後(hou)置25℃環境(jing)中反(fan)應(ying)30min。重(zhong)復(fu)步(bu)驟6。

7、 顯(xian)色(se)：每(mei)孔(kong)加入(ru)底物液A液50µl， 再(zai)加B液50µl，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻，25℃環境(jing)中避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)15min。

8、 測定：每(mei)孔(kong)加入(ru)終止(zhi)液50µl，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻，設(she)定酶標儀(yi)於(yu)450nm處(chu)（建(jian)議(yi)用雙波(bo)長(chang)450/630nm檢(jian)測，在5min內讀完數(shu)據(ju)），測定每(mei)孔(kong)吸(xi)光(guang)度(du)值（OD值）。

【結(jie)果(guo)判(pan)定】  

結(jie)果(guo)判(pan)定有(you)兩(liang)種方法(fa)，粗(cu)略(lve)判(pan)定可用第1種方法(fa)，定量(liang)判定用第2種方法(fa)。註(zhu)意(yi)樣本(ben)吸(xi)光(guang)值與其(qi)所含地(di)塞(sai)米松(song)成負相(xiang)關(guan)

1、粗(cu)略(lve)判(pan)定

用樣本(ben)的平(ping)均(jun)吸(xi)光(guang)度(du)值與標準吸(xi)光(guang)度(du)值比較即可得出(chu)其(qi)濃(nong)度(du)範圍(wei)(ppb)。假設(she)樣本(ben)1的吸(xi)光(guang)度(du)值為(wei)0.310， 樣本(ben)2的吸(xi)光(guang)度(du)值為(wei)0.820，標準液吸(xi)光(guang)度(du)值分(fen)別(bie)是：0ppb為(wei)1.610；0.1ppb為(wei)1.350；0.3ppb為(wei)1.030；0.9ppb為(wei)0.720； 2.7ppb為(wei)0.359；8.1ppb為(wei)0.198。則(ze)樣本(ben)1的濃(nong)度(du)範圍(wei)是2.7ppb-8.1ppb； 樣本(ben)2的濃(nong)度(du)範圍(wei)是0.3 ppb-0.9 ppb。乘(cheng)以(yi)其(qi)對(dui)應(ying)的稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)即為(wei)樣本(ben)中地(di)塞(sai)米松(song)實(shi)際(ji)含量(liang)。

2、定量(liang)分(fen)析(xi)

（1）百分(fen)吸(xi)光(guang)率(lv)的計(ji)算(suan)，標準品或樣本(ben)的百分(fen)吸(xi)光(guang)率(lv)等(deng)於(yu)標準品或樣本(ben)的百分(fen)吸(xi)光(guang)度(du)值的平(ping)均(jun)值（雙孔(kong)）除(chu)以第壹(yi)個標準（0標準）的吸(xi)光(guang)度(du)值，再(zai)乘(cheng)以(yi)100%，即：

B—標準溶(rong)液或樣本(ben)溶(rong)液的平(ping)均(jun)吸(xi)光(guang)度(du)值

B₀—0ng/ml標準溶(rong)液的平(ping)均(jun)吸(xi)光(guang)度(du)值

（2）標準曲(qu)線(xian)的繪(hui)制(zhi)與計(ji)算(suan)

以(yi)標準品百分(fen)吸(xi)光(guang)率(lv)為(wei)縱(zong)坐標，以地(di)塞(sai)米松(song)濃(nong)度(du)（ng /ml）的半(ban)對(dui)數(shu)為(wei)橫坐標，繪制(zhi)標準曲(qu)線(xian)圖。將(jiang)樣本(ben)的百分(fen)吸(xi)光(guang)率(lv)代(dai)入(ru)標準曲(qu)線(xian)中，從標準曲(qu)線(xian)上讀(du)出(chu)樣本(ben)所對(dui)應(ying)的濃(nong)度(du)，乘(cheng)以(yi)其(qi)對(dui)應(ying)的稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)即為(wei)樣本(ben)中地(di)塞(sai)米松(song)實(shi)際(ji)含量(liang)。

若利(li)用試劑盒專(zhuan)業(ye)分(fen)析(xi)軟件進(jin)行(xing)計算(suan)，更便(bian)於(yu)大(da)量(liang)樣本(ben)的準(zhun)確(que)、快速分(fen)析(xi)。（歡迎(ying)來電(dian)索(suo)取(qu)）  

 由(you)多(duo)個不同(tong)的實(shi)驗(yan)結(jie)果確(que)定了精(jing)密度(du)，圖2顯(xian)示(shi)出(chu)地(di)塞米松(song)檢(jian)測試劑盒的精(jing)密度(du)情(qing)況，獲得的標準吸(xi)收(shou)值的變異系(xi)數（%CV）對(dui)相(xiang)應地塞米松(song)濃(nong)度(du)作曲(qu)線(xian)，可以(yi)看到全部(bu)範圍(wei)內變異系(xi)數如(ru)此(ci)之低，可(ke)以得到(dao)很好(hao)的再(zai)現(xian)性。

【註(zhu)意(yi)事項(xiang)】  

1、 使用前(qian)將(jiang)所有(you)試(shi)劑溫度(du)回升(sheng)至室溫20-25℃。試(shi)劑及標本(ben)沒(mei)有(you)回到(dao)室溫（20-25℃）會(hui)導(dao)致所有(you)標準的OD值偏低。

2、 在(zai)洗(xi)板(ban)過程(cheng)中如(ru)果(guo)出(chu)現(xian)板孔(kong)幹(gan)燥的情(qing)況，則(ze)會伴(ban)隨(sui)著(zhe)出(chu)現(xian)標準曲(qu)線(xian)不成線(xian)性，重復(fu)性不好(hao)的現(xian)象(xiang)。所以(yi)洗(xi)板拍(pai)幹後(hou)應立(li)即進行(xing)下壹(yi)步(bu)操(cao)作。

3、 混(hun)合(he)要(yao)均(jun)勻(yun)，否(fou)則(ze)會出(chu)現(xian)重復性不好(hao)的現(xian)象(xiang)。

4、 反(fan)應(ying)終(zhong)止(zhi)液為(wei)2M硫(liu)酸(suan)，避(bi)免接觸皮膚。

5、 不(bu)要(yao)使用過了有(you)效日(ri)期(qi)的試(shi)劑盒，稀釋(shi)或攙雜(za)使用會引起(qi)靈敏度(du)、OD值的變化(hua)。不要(yao)交換(huan)使用不同批(pi)號(hao)的盒(he)中試(shi)劑。

6、 不(bu)用的微(wei)孔(kong)板(ban)放(fang)進自封袋(dai)密封；標準物質和(he)無色(se)的發色劑對(dui)光(guang)敏感，因(yin)此(ci)要(yao)避(bi)免直接暴(bao)露(lu)在光線(xian)下。

7、 顯(xian)色(se)液若有(you)任(ren)何(he)顏色(se)表(biao)明(ming)變質，應(ying)當棄之(zhi)。0標準的吸(xi)光(guang)度(du)值小於(yu)0.5個單(dan)位(wei)（A_450nm< 0.5 ）時，表(biao)示試劑可能變質。

8、 該試劑盒最(zui)佳反應溫度(du)為(wei)25℃，溫度(du)過高(gao)或過低將(jiang)導致檢(jian)測吸(xi)光(guang)度(du)值和靈敏度(du)發生(sheng)變化(hua)。

【儲存】

原(yuan)包(bao)裝(zhuang)應儲存於(yu)2～8℃保鮮冷藏(zang)，切(qie)勿(wu)冷凍。

【有(you)效期(qi)】

有(you)效期(qi)12個月;生(sheng)產日(ri)期(qi)、有(you)效期(qi)、生(sheng)產批(pi)號(hao)見(jian)外(wai)包(bao)裝(zhuang)。