環丙(bing)沙星(xing)ELISA檢測試劑盒簡(jian)介(jie)

環(huan)丙(bing)沙星(xing)快(kuai)速(su)檢測試劑盒

                                 （水(shui)樣）使(shi)用說明書(shu)

【原(yuan)理】

試(shi)劑盒采(cai)用間接競爭(zheng)ELISA方(fang)法(fa)，在(zai)微孔條(tiao)上預(yu)包(bao)被(bei)偶(ou)聯(lian)抗原，樣本中的(de)殘(can)留物環(huan)丙(bing)沙星(xing)和(he)微孔條(tiao)上預(yu)包(bao)被(bei)的偶(ou)聯(lian)抗原競爭(zheng)抗(kang)環(huan)丙(bing)沙星(xing)抗(kang)體，加入(ru)酶(mei)標記(ji)物後，用TMB底(di)物顯(xian)色(se)，樣(yang)本吸(xi)光(guang)值(zhi)與(yu)其所含殘留(liu)環(huan)丙(bing)沙星(xing)的(de)含量成負(fu)相關，與(yu)標準曲線比較(jiao)即可(ke)得(de)出相(xiang)應殘留物環(huan)丙(bing)沙星(xing)的(de)含量。

【試(shi)劑盒技術指(zhi)標(biao)】   

規(gui)       格：96孔(kong)/盒(he)

靈(ling) 敏(min) 度(du)： 0.5ppb

檢測時(shi)間： 45min

樣(yang)本定量(liang)檢測下(xia)限(xian)：  

水(shui)樣………………………………………20ppb

樣(yang)本回(hui)收率

水(shui)樣…………………………………80±15%

反應(ying)率

環(huan)丙(bing)沙星(xing)（CIF）………………………100％

【試(shi)劑盒組(zu)成】   

1、 微量測(ce)試(shi)孔：每條(tiao)8孔(kong)，壹(yi)板(ban)12條(tiao)

2、 標(biao)準液(ye)×6瓶(ping)：（1ml/瓶(ping)） 0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb

3、 高(gao)濃度標(biao)準(zhun)品溶(rong)液(ye)×1瓶(ping)：（1ml/瓶(ping)） 100ppb

4、 酶(mei)標記(ji)物               7ml……………………………紅(hong)色(se)帽(mao)

5、 抗(kang)體工(gong)作液(ye)          7ml……………………………綠色(se)帽(mao)

6、 底(di)物A液(ye)              7ml……………………………棕(zong)色(se)帽(mao)

7、 底(di)物B液(ye)　          7ml……………………………黑(hei)色帽(mao)

8、 終(zhong)止液(ye)                  7ml……………………………黃(huang)色帽(mao)

9、 20X濃縮洗滌(di)液(ye)40ml ……………………………白(bai)色帽(mao)

10、 2X濃縮復溶(rong)液(ye)   50 ml ……………………………藍(lan)色帽(mao)

【所用儀器(qi)、試劑】   

具(ju)備的(de)儀器(qi)：微孔酶(mei)標儀、打印(yin)機、均質(zhi)器(qi) 、氮(dan)氣(qi)吹(chui)幹(gan)裝置、振(zhen)蕩器(qi)、離心(xin)機、刻(ke)度移(yi)液(ye)管、天平（感(gan)量(liang)0.01g）

微量移(yi)液(ye)器(qi)：單道20µl-200µl、100µl-1000µl，多(duo)道250µl

試(shi)         劑：去離子水（或蒸(zheng)餾(liu)水）

【實(shi)驗前(qian)溶(rong)液(ye)配制】

配液(ye)1、用去離子水將(jiang)2X濃縮復溶(rong)液(ye)按(an)1：1稀(xi)釋(shi)

（1份濃縮復溶(rong)液(ye)+1份去離子水）用於樣本復溶(rong)。

配液(ye)2：將(jiang)40ml濃縮洗滌(di)液(ye)（20倍濃縮）用去離子水按(an)照(zhao)1：19

               稀(xi)釋(shi)（1份濃縮洗滌(di)液(ye)+19份去離子水），或按所需用量

               配制洗滌(di)液(ye)。

【樣(yang)本前處(chu)理步(bu)驟(zhou)】   

樣(yang)本前處(chu)理須(xu)知    處(chu)理任(ren)何樣本時(shi)，都(dou)必須註意(yi)：

（1）本試劑盒所檢測的組(zu)織樣(yang)本包(bao)括：動物(wu)組織、禽(qin)類(lei)和水(shui)產組(zu)織。eg:雞(ji)、鴨、牛(niu)、兔、魚、蝦(xia)、蛋(dan)類(lei)等(deng)。

（2）實(shi)驗中(zhong)必須使(shi)用壹(yi)次(ci)性吸(xi)頭(tou)，在(zai)吸(xi)取(qu)不(bu)同試劑時(shi)要更(geng)換(huan)吸(xi)頭(tou)。

（3）實(shi)驗之(zhi)前(qian)須檢查各(ge)種實驗器(qi)具是(shi)否(fou)幹(gan)凈，必要時(shi)可對(dui)實(shi)驗器(qi)具進行清(qing)潔(jie)，以避免汙(wu)染幹(gan)擾實(shi)驗結(jie)果。

樣(yang)本前處(chu)理步(bu)驟(zhou)

（a）水(shui)樣樣(yang)本

1、取(qu)出50μl 水(shui)樣於(yu)另(ling)壹(yi)試(shi)管中(zhong)，加入(ru)950μl樣(yang)本稀釋(shi)液(ye)混(hun)30s；

2、取(qu)50µl液(ye)體用於分(fen)析(xi)。

樣(yang)本稀釋(shi)倍數(shu)：40倍 

【酶(mei)標免(mian)疫(yi)分(fen)析(xi)程(cheng)序】   

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)：

1、 將(jiang)試劑盒從(cong)冷(leng)藏環(huan)境中取(qu)出(chu)並將(jiang)所需試劑從試(shi)劑盒取(qu)出(chu)，置室溫（20-25℃）平(ping)衡30min以(yi)上, 註意(yi)每(mei)種液(ye)體試(shi)劑使(shi)用前均須搖(yao)勻。

2、 按(an)需要取(qu)出(chu)微孔條(tiao)及(ji)板架，將(jiang)不(bu)用的微孔板(ban)重(zhong)新密封(feng)，保(bao)存於(yu)2-8℃，不(bu)要冷(leng)凍(dong)。

3、 編號：將(jiang)樣本和標(biao)準(zhun)品對應(ying)微孔按(an)序(xu)編號，每個(ge)樣本和標(biao)準(zhun)品均需做2孔(kong)平行(xing)，並記錄(lu)標(biao)準孔的樣(yang)本孔所在(zai)的(de)位(wei)置。

4、 加標(biao)準品/樣(yang)本50µl /孔(kong)，然(ran)後加入(ru)50µl/孔(kong)酶標(biao)記物；再加入(ru)50µl/孔(kong)抗體工(gong)作液(ye)。輕(qing)輕振(zhen)蕩混(hun)勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huan)境反應(ying)30min。

5、 取(qu)出用洗滌(di)液(ye)按(an)每孔250μl洗板(ban)4-5次(ci)，每次(ci)浸泡15-30秒(miao)，拍幹(gan)（拍幹(gan)後未被清除的氣(qi)泡可(ke)用幹(gan)凈的(de)槍頭刺(ci)破(po)）。

6、 顯(xian)色(se)：每(mei)孔(kong)加入(ru)底(di)物(wu)液(ye)A液(ye)50µl再加B液(ye)50µl，輕(qing)輕振(zhen)蕩混(hun)勻，25℃環(huan)境避光(guang)顯(xian)色(se)15min。

7、 測(ce)定：每(mei)孔加入(ru)終(zhong)止(zhi)液(ye)50µl，輕(qing)輕振(zhen)蕩混(hun)勻，設定(ding)酶(mei)標儀於450nm處(chu)（建議用雙(shuang)波長(chang)450/630nm檢測在(zai)5min內讀(du)完(wan)數(shu)據），測定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)值（OD值(zhi)）。

【結(jie)果判(pan)定(ding)】   

      結(jie)果判(pan)定(ding)有兩(liang)種方(fang)法(fa)，粗略判(pan)定(ding)可用第1種方(fang)法(fa)，定量(liang)判(pan)定(ding)用第2種方(fang)法(fa)。註意(yi)樣(yang)本吸(xi)光(guang)值(zhi)與(yu)環丙(bing)沙星(xing)的(de)含量成負(fu)相關。

1、粗(cu)略判(pan)定(ding)

用樣本的平(ping)均(jun)吸(xi)光(guang)度(du)值與(yu)標準品比較(jiao)即可(ke)得(de)出其(qi)濃度範(fan)圍(wei)(ng/ml)。假設樣(yang)本1的(de)吸(xi)光(guang)度(du)值為0.238， 樣(yang)本2的(de)吸(xi)光(guang)度(du)值為0.946，標(biao)準液(ye)吸(xi)光(guang)度(du)值分(fen)別是(shi)：0ppb為(wei)1.845；0.5ppb為(wei)1.542；1.5ppb為(wei)1.130； 4.5ppb為(wei)0.635；13.5ppb為(wei)0.326； 40.5ppb為(wei)0.156。則(ze)樣本1的(de)濃度範(fan)圍(wei)是(shi)13.5ppb-40.5ppb；樣(yang)本2的(de)濃度範(fan)圍(wei)是(shi)1.5ppb-4.5ppb。乘(cheng)以其(qi)對應的稀(xi)釋(shi)倍數(shu)即為(wei)樣(yang)本中環(huan)丙(bing)沙星(xing)的(de)實際(ji)濃度。

2、定(ding)量分(fen)析(xi)

（1）百(bai)分(fen)吸(xi)光(guang)率的(de)計(ji)算(suan)，標(biao)準(zhun)品或樣(yang)本的百(bai)分(fen)吸(xi)光(guang)率等(deng)於標(biao)準品或樣(yang)本的百(bai)分(fen)吸(xi)光(guang)度(du)值的平均(jun)值(zhi)（雙(shuang)孔）除以第壹(yi)個(ge)標(biao)準(zhun)（0標(biao)準）的(de)吸(xi)光(guang)度(du)值，再乘(cheng)以(yi)100%，即

B—標(biao)準溶(rong)液(ye)或(huo)樣本溶(rong)液(ye)的(de)平均吸(xi)光(guang)度(du)值

B₀—0ng/ml標(biao)準溶(rong)液(ye)的(de)平均吸(xi)光(guang)度(du)值

（2）標(biao)準曲線的繪制與(yu)計算(suan)

以(yi)標準(zhun)品百(bai)分(fen)吸(xi)光(guang)率為(wei)縱(zong)坐(zuo)標，以環(huan)丙(bing)沙星(xing)標(biao)準(zhun)品濃度（ng/ml）的(de)半(ban)對數(shu)為橫(heng)坐(zuo)標，繪制標準曲線圖。將(jiang)樣本的百(bai)分(fen)吸(xi)光(guang)率代(dai)入(ru)標(biao)準(zhun)曲線中，從標(biao)準(zhun)曲線上讀(du)出(chu)樣(yang)本所對應的濃度，乘(cheng)以(yi)其對(dui)應的稀(xi)釋(shi)倍數(shu)即為(wei)樣(yang)本中環(huan)丙(bing)沙星(xing)的(de)實際(ji)濃度。

若(ruo)利(li)用試劑盒專(zhuan)業(ye)分(fen)析(xi)軟件進行計(ji)算(suan)，更(geng)便(bian)於(yu)大(da)量(liang)樣本的準(zhun)確(que)、快(kuai)速(su)分(fen)析(xi)。（歡迎來電(dian)索(suo)取）

3、標(biao)準準(zhun)曲線：

B/B0 (%)

           0.5                1.5                  4.5                  13.5                40.5

 (ppb) [µg/kg]

圖(tu)1：環(huan)丙(bing)沙星(xing)檢測試劑盒的(de)回(hui)歸(gui)曲線

4、再現性：

%CV

         0       0.5      1.5      4.5     13.5     40.5

(ppb) [µg/kg]

圖(tu)2：環(huan)丙(bing)沙星(xing)檢測試劑盒的(de)精密(mi)度

由多(duo)個不(bu)同的實驗結(jie)果確(que)定(ding)了(le)精(jing)密(mi)度(du)，圖2顯(xian)示(shi)出(chu)環(huan)丙(bing)沙星(xing)檢測試劑盒的(de)精密(mi)度情況(kuang)，獲(huo)得的標準吸(xi)收值(zhi)的(de)變(bian)異(yi)系數(shu)（%CV）對(dui)相應(ying)環(huan)丙(bing)沙星(xing)濃度作(zuo)曲線，可以看(kan)到(dao)在(zai)全(quan)部範圍(wei)內變(bian)異(yi)系數(shu)如此(ci)之(zhi)低(di)，可以得到(dao)很(hen)好的再現性。

【註意(yi)事項(xiang)】   

1、 使(shi)用前將(jiang)所有試(shi)劑溫度回(hui)升(sheng)至(zhi)室溫20-25℃。試(shi)劑及(ji)標本沒(mei)有回(hui)到(dao)室溫（20-25℃）會導致(zhi)所有標(biao)準(zhun)的(de)OD值(zhi)偏低。

2、 在(zai)洗板(ban)過程中如(ru)果出(chu)現板(ban)孔幹(gan)燥的情況(kuang)，則(ze)會伴(ban)隨著(zhe)出現標(biao)準曲線不(bu)成線(xian)性，重(zhong)復性不(bu)好的現象(xiang)。所以洗板(ban)拍幹(gan)後應(ying)立即進行下(xia)壹(yi)步(bu)操(cao)作(zuo)。

3、 混(hun)合(he)要均(jun)勻，否則(ze)會出(chu)現重(zhong)復性不(bu)好的現象(xiang)。

4、 反應(ying)終止(zhi)液(ye)為(wei)2M硫(liu)酸(suan)，避免接(jie)觸(chu)皮膚(fu)。

5、 不(bu)要使(shi)用過了(le)有效(xiao)日(ri)期(qi)的試劑盒，稀(xi)釋(shi)或攙(chan)雜(za)使(shi)用會引(yin)起(qi)靈(ling)敏(min)度(du)、OD值(zhi)的變(bian)化。不(bu)要交(jiao)換(huan)使(shi)用不(bu)同批號的盒中試(shi)劑。

6、 不(bu)用的微孔板(ban)放(fang)進自封(feng)袋(dai)密封；標準(zhun)物(wu)質和(he)無(wu)色的(de)發色劑對光(guang)敏(min)感，因此(ci)要避免直接暴露在(zai)光(guang)線(xian)下(xia)。

7、 顯(xian)色(se)液(ye)若(ruo)有任(ren)何顏(yan)色(se)表明變(bian)質(zhi)，應(ying)當棄之(zhi)。0標(biao)準的(de)吸(xi)光(guang)度(du)值小於0.5個(ge)單位(wei)（A_450nm< 0.5 ）時(shi)，表示(shi)試(shi)劑可能變(bian)質(zhi)。

8、 該(gai)試劑盒最佳(jia)反應(ying)溫度為(wei)25℃，溫度過高或過低將(jiang)導致(zhi)檢測吸(xi)光(guang)度(du)值和靈敏(min)度(du)發生變(bian)化。

【儲(chu)存】

原(yuan)包(bao)裝應儲存於(yu)2～8℃保(bao)鮮冷藏，切(qie)勿(wu)冷凍(dong)。

【有效(xiao)期(qi)】

有效(xiao)期(qi)12個(ge)月(yue);生(sheng)產日(ri)期(qi)、有效(xiao)期(qi)、生產批(pi)號見(jian)外包(bao)裝。